[发明专利]一种检测干酪乳杆菌菌株的方法及其试剂盒和引物对

说明书

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种检测干酪乳杆菌菌株的方法及其试剂盒和引物。

背景技术

干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)属于乳杆菌属(Lactobacillus)，是革兰氏阳性菌，不产芽孢，无鞭毛，不运动，兼性异型发酵乳糖，不液化明胶；最适生长温度为37℃，G+C含量为45.6％～47.2％；菌体长短不一，两端呈方形，常成链；菌落粗糙，灰白色，有时呈微黄色，能发酵多种糖。干酪乳杆菌存在于人的口腔、肠道内含物和大便及阴道中，也常常出现在牛奶和干酪、乳制品、饲料、面团和垃圾中。干酪乳杆菌是一种有益于人体健康的益生菌。2001年卫生部公布了可用于保健食品中的益生菌菌种名单，其中包括干酪乳杆菌及干酪乳杆菌干酪亚种(又叫副干酪乳杆菌)。目前我国对干酪乳杆菌的研究甚少。

干酪乳杆菌作为益生菌的一种，能够耐受有机体的防御机制，其中包括口腔中的酶、胃液中低pH值和小肠的胆汁酸等。所以干酪乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存活，起到调节肠内菌群平衡、促进人体消化吸收等作用。同时，干酪乳杆菌具有高效降血压、降胆固醇、促进细胞分裂，产生抗体免疫、增强人体免疫及预防癌症和抑制肿瘤生长等功能；还具有缓解乳糖不耐症、过敏等益生保健作用。近年来，由于干酪乳杆菌对其宿主营养、免疫、防病等具有显著的益生功效，越来越成为人们研究、开发、生产的焦点。而高血压人群的增加使得对干酪乳杆菌的研究以及用其开发功能性乳制品的意义显得愈加重要。

干酪乳杆菌作为益生菌之一被用作牛奶、酸乳、豆奶、奶油和干酪等乳制品的发酵剂及辅助发酵剂，尤其在干酪中应用较多，为了适应干酪中的高含量盐及低pH值，需要通过一些重要氨基酸的代谢以增加风味并促进干酪的成熟。近几年来，干酪乳杆菌越来越多地用于乳制品中，但是其是否真正添加以及是否能够存活于乳制品中则需要乳品检测机构进行快速鉴定。传统的检测方法费时费力，通常需要3～5天才能确定。此外，传统的检测方法按照国标GB4789.35-2010的要求，所需的样品量至少为25g或25mL，因此检测的灵敏度通常＞4CFU/g或＞4CFU/mL，由上可知，传统的乳制品中干酪乳杆菌的检测方法其检测效率较低，检测成本较高。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有传统技术检测时间长、费时费力、成本高的缺陷，提供一种检测干酪乳杆菌菌株的方法及其试剂盒和引物。采用所述的方法检测干酪乳杆菌，检测速度快，成本低，灵敏度高，检测结果特异性好，判定简单易行，并且检测食品中的干酪乳杆菌菌株也结果准确可靠。

本发明的目的是通过下列技术方案来实现的。

本发明采用的技术方案之一是：一种特异性扩增干酪乳杆菌的引物对，其核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO.1所示和如序列表中SEQ ID NO.2所示。

其中，核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示的引物称为SEN2-L；核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示的引物称为SEN2-R。所述引物SEN2-L和引物SEN2-R所扩增的序列为干酪乳杆菌组氨酸激酶基因序列中的保守序列。

本发明采用的技术方案之二是：一种用于特异性扩增干酪乳杆菌的试剂盒，其包括核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示和如序列表中SEQ ID NO.2所示的引物对。

较佳地，所述的试剂盒中还包括dNTP、PCR缓冲液、Mg²⁺、Taq DNA聚合酶和ddH₂O中的一种或多种；更佳地，所述的试剂盒还包括基因组DNA抽提试剂。

本发明采用的技术方案之三是：一种检测干酪乳杆菌菌株的方法，其包括以下步骤：

(1)提取待检样品的基因组DNA作为模板，核苷酸序列分别为如序列表中SEQ ID NO.1所示和如序列表中SEQ ID NO.2所示的引物对作为引物，进行PCR扩增；

(2)检测步骤(1)PCR扩增产物中是否在461bp位置存在单一扩增产物。