[发明专利]一种甾体皂苷化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及天然产物化学领域，具体地说，涉及一种新的C₂₁甾体化合物的分离制备方法，以及单体化合物或者含有它们的药物组合物作为抗肿瘤药物的用途。

背景技术

傣百解为萝摩科南山藤属植物苦绳Dregea sinensis Hemsl.的干燥根。全年可采，除去杂质，切片，晒干，生于海拔500-3000m的山地疏林中或灌木丛中。在我国西双版纳、德宏、西盟、孟连、新平、元江等地，以及老挝、缅甸等国家的傣族居住区使用极其广泛。傣百解以根入药，性凉、味苦，入火、土、风塔，具有清火解毒、消肿止痛之功效，药用于治疗风湿痹痛，咳嗽痰喘，跌打骨折，痈疮疖肿、乳汁不通等症。随着傣药研究的深入，已经有很多的科研工作者研究傣百解的化合物成分和药物机理研究。

目前已有多位科研工作者对其含有的化学成分进行了研究，对于傣百解提取分离的研究已经比较成熟，已经分离提取出多种的化合物，如，甾体皂苷类，苯丙素类，糖类等活性成分。从傣百解中分离的得到的甾体皂苷类化合物主要是C₂₁甾体类，C₂₁甾体衍生物是植物中一类重要的生物活性物质。

发明内容

本发明首次从傣百解(苦绳根茎)中分离、纯化、鉴定出一种具有抗肿瘤的生物活性和药理作用的新型C₂₁甾体化合物。

本发明的第一个目的是提供一种甾体皂苷化合物。

本发明的第二个目的是提供上述甾体皂苷化合物的制备方法。

本发明的第三个目的是提供上述甾体皂苷化合物的用途，所述用途为在制备用于治疗肿瘤细胞疾病的药物中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种甾体皂苷化合物，具有式(I)所示的结构：

其中R₁为R₂为

其中，所述化合物(I)提取自傣百解。

所述提取方法包括如下步骤：

(1)傣百解用70％-100％乙醇加热回流提取，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取，收集乙酸乙酯萃取部分；乙醇优选为95％乙醇(体积比)；

(2)乙酸乙酯萃取部分溶于氯仿中，过160-200目的硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇系统以体积比100:1、50:1、15:1、7:1、4:1、纯甲醇系统梯度洗脱，收集7:1的洗脱部分；

(3)7:1的洗脱部分溶于氯仿中，过200-300目的硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇系统以体积比60:1等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集20ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#......并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分2-6#合并液；

(4)将待分离的洗脱馏分2-6#合并液溶于氯仿中，过200-300目的硅胶柱色谱，采用石油醚-乙酸乙酯系统以体积比2:1等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集20ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#……并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分8-15#合并液；

(5)将待分离的洗脱馏分8-15#合并液溶于甲醇中，过ODS反相色谱柱，采用78％甲醇系统等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集10ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#……并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分11-32#合并液；

(6)将待分离的洗脱馏分11-32#合并液溶于甲醇中，采用反相C18柱经行73％甲醇的等度洗脱，紫外检测器的检测波长为230-280nm，收集141-146min出现的化合物吸收峰；

此馏分即为本发明所述甾体皂苷化合物。

其中所述步骤(1)具体可以为：取傣百解15kg，粉碎成粗粉,用9倍量95％乙醇加热回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压浓缩除去乙醇，搅拌加水稀释至40L，静置过夜，过滤；所得沉淀干燥、粉碎后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取；收集萃取液，旋转蒸发，得到乙酸乙酯萃取部分。

所述步骤(2)-(6)中萃取部分或洗脱馏分溶于溶剂的浓度为30-80mg/ml；优选为50mg/ml。

所述步骤(2)中梯度洗脱的方法如下：1-2个柱体积采用氯仿-甲醇100:1洗脱；3-4个柱体积采用氯仿-甲醇50:1洗脱；5-6个柱体积采用氯仿-甲醇15:1洗脱；7-8个柱体积采用氯仿-甲醇7:1洗脱；8-9个柱体积采用氯仿-甲醇4:1洗脱；最后纯甲醇冲洗残余样品。