[发明专利]基于环介导等温扩增技术检测苹果锈果类病毒的引物组、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种环介导等温扩增的引物组，其特征在于，所述的引物组包括外侧引物对F3和B3、内侧引物对FIP和BIP，其序列分别为SEQ ID NO:1～4。

2.权利要求1所述的引物组在检测苹果锈果类病毒中的应用。

3.权利要求1所述的引物组在制备检测苹果锈果类病毒的试剂盒中的应用。

4.一种检测苹果锈果类病毒的环介导等温扩扩增试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含如下组分：

1）环介导等温扩增反应液A：

2×RT-LAMP Mix 12.5 μL、AMV-Bst混合液1.5 μL、RNase-Free Water 2.8 μL、RT-LAMP检测引物组6.2 μL，FIP和BIP引物各2.5 μL、终浓度均为1μM；F3和B3 引物各0.6 μL，终浓度均为0.25 μΜ；引物F3、B3、FIP和BIP分别具有序列表SEQ ID NO:1～4的碱基序列；

2）B反应液是阳性对照样品：含苹果锈果类病毒RNA模板，作为阳性模板；

3）C反应液是空白对照样品：为去离子水；

4）显色剂：为10％的荧光染料SYBR GREEN I。

5.一种应用权利要求4所述的试剂盒检测样品中苹果锈果类病毒的方法，其特征在于，所述的方法包括下列步骤：

1）待检样品RNA提取

采取Trizol 法或RNA提取试剂盒抽提RNA模板，

2）苹果锈果类病毒环介导等温扩增

A:在反应管中依次加入待检模板RNA 2 μL和环介导等温扩增反应液A 23μL，充分混匀；

B:在63 ℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应60 min；

C:80 ℃终止反应，5 min后取出待检；

扩增时，设立2个对照：阳性对照和空白对照；

3）显色检测

在每个反应管中加入1μL显色剂，直接用肉眼观察颜色变化，如果样品的反应管中扩增反应液颜色变为橙色，说明待检样品不含苹果锈果类病毒，如果颜色变为绿色，则说明待检样品含有苹果锈果类病毒。