[发明专利]大白菜抗根肿病CRb基因的连锁分子标记、引物及抗根肿病植株的选择方法

说明书

技术领域

本申请为原发明专利申请“大白菜抗根肿病CRb基因的连锁分子标记、引物及抗根肿病植株的选择方法”的分案申请，其专利申请日：2013年4月16日；专利申请号：2013101322309；发明创造名称：大白菜抗根肿病CRb基因的连锁分子标记、引物及抗根肿病植株的选择方法。

技术领域

本发明涉及与大白菜抗根肿病基因CRb紧密连锁的分子标记、引物序列以及筛选大白菜抗根肿病植株的方法。

背景技术

2002年，本课题组获得了1份抗芸薹根肿病的大白菜双单倍体系‘CR Shinki DH’系，研究表明该抗病材料抗芸薹根肿菌生理小种2、4和8（Piao等，Conversion of AFLP marker linked to clubroot resistance gene into SCAR marker. 2002，J Kor Soc Hort Sci 43:653–665）。进一步研究证明抗根肿病基因为显性单基因，并命名为CRb（Piao等，SCAR and CAPS mapping of CRb, a gene conferring resistance to Plasmodiophora brassicae in Chinese cabbage （Brassica rapa ssp. pekinensis），Theor Appl Genet，2004，108:1458-1465）。

在芸薹种抗根肿病品种转育过程中，每代都需要采用田间接种根肿病菌的方法鉴定中间材料的基因型，而且环境条件会影响到正确中间材料的选择，这样势必影响转育进程，因此抗病品种转育难的问题还没有彻底解决。分子标记辅助选择技术（MAS）可能是最终解决这一问题的有效途径。

目前，只有国内沈阳农业大学朴钟云等（2004）获得了与芸薹种抗根肿病基因CRb连锁的CAPS标记。其中最近的两个侧翼标记TCR05和TCR09，见（Piao等，SCAR and CAPS mapping of CRb, a gene conferring resistance to Plasmodiophora brassicae in Chinese cabbage（Brassica rapa ssp. pekinensis），Theor Appl Genet，108:1458-1465），但这些标记与CRb的遗传距离较远。因此，本实验在这两个CAPS标记基础上，开发与大白菜抗根肿病基因CRb紧密连锁的标记，精细定位该基因，从而简化大白菜抗根肿病品种的转育程序。

发明内容

发明目的是：

（1）提供与大白菜抗根肿病基因CRb紧密连锁的分子标记；

（2）提供由所述标记的全长序列和PCR引物序列；

（3）提供在对大白菜抗根肿病基因进行辅助选择的过程中对上述标记进行应用的方法。

（4）通过特异引物PCR扩增可对待测植株进行苗期鉴定，大大提高育种效率，缩短了育种进程。

本发明提供的技术方案如下：

1．与大白菜抗根肿病CRb基因紧密连锁的分子标记：TCR25、TCR108、TCR116、TCR30、TCR74分别具有如下核苷酸序列：

（1）TCR25（301bp）：

5’-CGTTTAAATTTGTTTATACGATGCAAATTCACTAGTTTATATGATATATATGTATACTATA TATATATTTGATATATATATATATATATATATATATTTGGATTGTAACCACCTCGAATTTTGAGATAATTATCATGTGAAAACGAAGACAAAAAAAAATTATGGGCATATTGATTGTATCTAATAAATTAATCATCCGATTAGTATATTCAAAATTAAAAAAAATCTTTATATTTTAAGAGAAATAGTGATAATGTCAAATATAACACACAAAAAAAATTCATATTCTGTTAATGGGACA-3’

（2）TCR108（1366bp）: