[发明专利]一种用于鉴定中药木通的引物对及其应用

权利要求书

1.用于鉴定或辅助鉴定中药木通的引物对，其特征在于：所述引物对为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对。

2.用于鉴定或辅助鉴定中药木通的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中含有权利要求1所述的引物对、dNTP和DNA聚合酶。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有荧光染料SYBR Green I。

4.制备权利要求1所述引物对的方法，包括将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装的步骤。

5.制备权利要求2或3所述试剂盒的方法，包括如下A)或B)的步骤：

A)将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装后，与分别单独包装的dNTP和DNA聚合酶包装于同一个试剂盒内：

B)将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装后，与分别单独包装的dNTP、DNA聚合酶和SYBR Green I包装于同一个试剂盒内。

6.权利要求1所述的引物对，或权利要求2或3所述的试剂盒，在鉴定或辅助鉴定中药木通中的应用。

7.利用权利要求1所述的引物对，或权利要求2或3所述的试剂盒，鉴定或辅助鉴定待测中药样品中是否含有中药木通的方法，包括如下步骤：

(a)从待测中药样品中提取基因组DNA作为模板，采用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增；

(b)为如下(b1)或(b2)：

(b1)根据步骤(a)所得PCR产物的大小，按照如下方法确定待测中药样品中是否含有中药木通：若PCR产物中含有大小为250-750bp的DNA片段，则所述待测中药样品中含有或候选含有中药木通；若PCR产物中不含有大小为250-750bp的DNA片段，则所述待测中药样品中不含有或候选不含有中药木通；

(b2)向步骤(a)扩增后的反应体系中加入荧光染料SYBR Green I，得到含有荧光染料的体系，按照如下方法确定待测中药样品中是否含有中药木通：若观察到所述含有荧光染料的体系产生绿色荧光，则所述待测中药样品中含有或候选含有中药木通；若观察不到所述含有荧光染料的体系产生绿色荧光，则所述待测中药样品不含有或候选不含有中药木通。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：在步骤(a)中，进行所述PCR扩增时采用的退火温度为58℃。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：进行所述PCR扩增时采用的扩增程序为：88℃1min；88℃5s、58℃10s、28个循环。

10.根据权利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于：在步骤(b2)中，确定所述含有荧光染料的体系是否产生绿色荧光是在365nm紫外波长下进行检测的。