[发明专利]一种可被4’磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列及其用于固定蛋白质的方法

权利要求书

1.一种可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列，其特征在于为如核苷酸序列SEQ ID NO:1所示的大肠杆菌酰基载体蛋白基因序列或如核苷酸序列SEQ ID NO:2所示的可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的短肽基因中的一种。

2.根据权利要求1所述的可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列，其特征在于：所编码的具有生物活性的短肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。

3.一种重组表达载体，其特征在于包含权利要求1所述的可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列，将其用于与目的基因融合表达。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，具体制备步骤为：将可被4’磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列与目的基因重组融合构建到表达载体获得；所述的表达载体为表达载体pET系列载体。

5.一种包含上述重组表达载体的大肠杆菌的重组表达系统，其特征在于具体为：将权利要求4所述的重组表达载体转化进大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，培养至OD600为0.5～0.7，加入终浓度为0.5mM的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，于30℃诱导蛋白表达10h；5000g，10min，4℃离心收集菌体，获得表达融合目标蛋白的大肠杆菌。

6.一种基于可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列固定蛋白质的方法，其特征在于：由权利要求5的大肠杆菌的重组表达系统，获得包含目标蛋白的融合蛋白，经酶AcpS或Sfp催化进行4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰，由4’-磷酸泛酰巯基乙胺的高活性巯基介导固定化，实现固定目标蛋白。

7.根据权利要求6所述的基于可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列固定蛋白质的方法，其特征在于：所述的固定化为在固定化缓冲液中按1mg：0.2ml的比例将重组蛋白与Sulfo Link coupling resin混合，30℃温浴1h，实现蛋白固化；

所述的固定化缓冲液为50mmol Tris HCl，5mmol EDTA-Na，pH 8.5。