[发明专利]一种真菌毒素检测数据库的构建方法、真菌毒素检测方法、试剂盒及装置

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学组织工程技术领域，尤其涉及一种真菌毒素检测数据库的构建方法、真菌毒素检测方法、试剂盒及装置。

背景技术

真菌毒素(mycotoxin)是由某些真菌在生长过程中产生的有毒次级代谢产物，目前已知的种类有300多种，有30多种真菌毒素对人类和动物有强毒性，包括黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、赭曲毒素和伏马毒素等，这些毒素可广泛污染食物、农作物及其制品等。产毒真菌污染食品后，可使食用者中毒，有些毒素可以诱导基因突变和产生致癌性，有些则显示出对特定器官的毒性。

用来检测真菌毒素的常用方法有LC-MS、GC-MS、HPLC等，但是这几种方法检测步骤相对繁琐，对仪器要求较高，不适合大量样本的快速检测。近年来应用最广泛的是酶联免疫吸附测定方法(ELISA)，该方法具有敏感、特异、稳定、简便的优点，适合真菌毒素的检测。但是，在ELISA检测过程中，需要添加毒素标准品，增加了检测人员被毒素污染的风险。同时需要绘制标准曲线，计算过程较复杂，耗时较长。

因此，有必要提供一种能简便、快速检测真菌毒素的方法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明实施例提供了一种真菌毒素检测数据库的构建方法、真菌毒素检测方法、试剂盒及装置。

本发明通过构建真菌毒素检测数据库，联合单标准酶联免疫检测技术，检测人员只需使用本发明提供的不含毒素的单个标准品，即可完成对待测样品的检测；相对传统ELISA检测技术来说，本发明提供的技术方案不再需要使用含有毒素的标准品制作标准，在保证准确度和灵敏度的同时，大大提高了ELISA检测技术的可操作性、减少了检测试剂的使用，具有简便、省时、快速、实用、环保等优点。

第一方面，本发明提供了一种真菌毒素检测数据库的构建方法，包括如下步骤：

(1)提供或配置N种真菌毒素的系列标准品，每种真菌毒素的系列标准品包括M个浓度梯度的溶液，其中，N、M均为自然数，且M不小于5；

(2)取每个系列标准品分别采用ELISA检测，其中，每个系列标准品均进行ΣR_Q+P次ELISA检测，对所得的检测数据进行线性回归分析，制作标准曲线，得到N*(ΣR_Q+P)条标准曲线，构建成真菌毒素检测数据库；其中，Q表示ELISA检测中的Q种影响因素，R_Q为第Q种影响因素中设置了R_Q种变量，Q、R、P均为自然数，且Q不小于2；

P表示Q种影响因素各取随机变量进行P次检测，每次P检测时，在Q种影响因素中随机设置至少2种影响因素，第Q种影响因素设置了R’_Q种变量，各种影响因素的R’_Q种变量进行随机组合，P＝Σ(C_Q²)[(R’_Q)]，所述(C_Q²)表示在Q种影响因素中随机设置至少2种影响因素，(R’_Q)表示第P次检测时，选取的各影响因素的R’_Q的乘积，R’为自然数，Σ(C_Q²)[(R’_Q)]表示(C_Q²)种影响因素组合下的(R’_Q)之和。

在本发明一实施例中，所述步骤(1)中，所述N种真菌毒素包括但不限于目前已知的300多种真菌毒素。

在本发明一实施例中，所述步骤(1)中，所述N种真菌毒素为粮食制品中真菌毒素残留。

在本发明一优选实施例中，所述步骤(1)中，所述N种真菌毒素包括黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、赭曲毒素、伏马毒素、T2毒素、棒曲霉素和展青霉素的至少一种。

在本发明一实施例中，所述步骤(1)中，所述M为5～8的自然数。

在本发明一实施例中，所述步骤(1)中，所述M为5或6。

如本发明所述的，所述步骤(2)中，“Q种影响因素”为传统ELISA检测中，制备标准曲线时影响整个反应体系OD值的因素，包括但不限于反应体系的操作时间(比如变化孵育的时间或显色的时间)、孵育温度(比如样品和抗体的孵育时间、显色液的孵育时间)、加样时间(每次加样1～2min)、洗板方式(比如洗板的次数)以及试剂盒存放时间，其中，所述反应体系即ELISA间接竞争反应体系，包括抗原或是二抗的包被、抗原抗体的反应、显色反应等常规实验步骤。