[发明专利]抗稻瘟病基因Pi2的HRM检测方法及其应用

权利要求书

1.一种水稻抗稻瘟病基因Pi2的HRM检测方法，其特征在于所述HRM检测体系包含一对检测引物，所述检测引物的序列是：正向引物：TAGGTGTGACAACAAACGGGTC；和反向引物：AATCCCAGATTCCAACCTGCAC。

2.权利要求1所述的HRM检测方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

a)提取待测样本DNA；

b)配制包含待测样本DNA、引物对、PCR试剂和EvaGreen荧光染料的PCR反应体系进行PCR扩增；和

c)对PCR产物进行HRM分析扫描。

3.权利要求2所述的HRM检测方法，其中所述的提取待测样本DNA的方法是：取样，直接加提取液研磨，沸水浴10min后，静置分层取上清即为待测样本DNA，其中所述的提取液包含10mM Tris-HCl、0.5mM EDTA和0.15M KCl。

4.权利要求2所述的HRM检测方法，其中所述的PCR反应体系包含1μLPCR模板，0.5UrTaq DNA聚合酶，1×PCR缓冲液，250μM dNTP，0.1μM正向和反向引物和0.1μL 20×EvaGreen荧光染料。

5.权利要求2所述的HRM检测方法，其中所述的PCR扩增条件是：95℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃10s，40个循环；72℃2min，紧接着95℃变性1min，12℃复性1min。

6.一种基于HRM技术的用于水稻抗稻瘟病基因Pi2检测的PCR试剂盒，其特征在于所述PCR试剂盒包含一对检测引物，所述检测引物的序列是：正向引物：

TAGGTGTGACAACAAACGGGTC；和反向引物：AATCCCAGATTCCAACCTGCAC。

7.权利要求6所述的试剂盒，其中所述的试剂盒还包含PCR试剂和荧光染料。

8.权利要求6-7之任一所述的试剂盒的使用方法，其特征在于所述使用方法包括如下步骤：

a)提取待测样本DNA；

b)配制包含待测样本DNA、引物对、PCR试剂和EvaGreen荧光染料的PCR反应体系进行PCR扩增；和

c)对PCR产物进行HRM分析扫描。

9.权利要求6-7之任一所述的试剂盒在检测水稻抗稻瘟病基因Pi2中的应用。