[发明专利]一种微小RNA纳米微球的制备及其在抗肿瘤方面的应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，特别是涉及一种微小RNA纳米微球的制备及其在抗肿瘤方面的应用。

背景技术

非编码小RNA（microRNA，miRNA）通过调控癌基因或抑癌基因的表达参与肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、迁移、血管生成、蛋白裂解等生物程序的调控。除了调控基因表达外，miRNA 本身也可以作为癌基因或抑癌基因而成为肿瘤治疗的靶标。通过导入抑癌miRNAs可控制肿瘤或诱导其向正常方向发展，甚至逆转至正常；同时，引入与具有癌基因特性的miRNA 互补的miRNA反义寡核苷酸，降低肿瘤中miRNA的表达，可以抑制致癌miRNA的表达，抑制癌细胞生长，从而达到控制肿瘤生长的目的。阐明内源性miRNA作用原理，对于疾病的基因诊断和治疗具有重要意义。miR-125b属于癌基因，在多种肿瘤组织中表达量显著升高，其反义寡核苷酸（miR-125b-AS）可以抑制miR-125b的抑制肿瘤生长的作用，具有成为抗癌药物的可能性。

目前对于miRNA的研究一般采用过表达或缺失表达技术研究miRNA的体内功能，通常将miRNA的模拟物（即合成双链的miRNA）借助转染试剂转染细胞，实现细胞内miRNA的瞬时转染、短暂的过表达，或以miRNA为靶点设计小分子物质拮抗miRNA的作用，如，miRNA反义寡聚(脱氧)核苷酸(anti—miRNA oligonucleotides，AMOs) 、核酸修饰的寡核苷酸[1ocked nucleic acid(LNA)一modified oligonucleotides]以及miRNA拮抗分子(antagomirs) 等。但miRNA模拟物和AMOs的应用都存在一些问题，包括1）稳定性差，miRNA模拟物或miRNA-AMOs不能长期保存，且外源的小分子RNA 在血清中很快被降解，经化学修饰后虽然稳定性可增加，但在机体中也很快被清除。2）不能直接进入细胞发挥生物学功能。小分子RNA属于极性大分子，需要借助转染试剂才能进入细胞发挥作用，上述问题极大地限制了小分子RNA的应用。

纳米颗粒作为基因治疗的载体具有一些显著地优点，例如能够保护核酸不被核酸酶降解、具有生物亲和性等，尤其适用于基因的体内转染。因此，纳米技术与miRNA结合将为miRNA的研究提供更好的技术平台。发展具有更长体内半衰期且生物安全性好的改良miRNA分子和miRNA反义分子，是目前研究miRNA的体内功能迫切需要解决的问题，也是将基础研究进展转化为临床的技术保障。miR-125b是具有致癌作用的微小RNA，前期研究证实miR-125b反义分子（miR-125b antisense）具有良好的抑制肿瘤生长的作用，但miRNA目前研究尚存在转染困难、稳定性差、在生物体内的作用难以证实等问题，难以在肿瘤病人中应用等难题。本发明将其制备为纳米微球，可以直接在生物体内发挥抗肿瘤作用。

发明内容

本发明提供了一种稳定性好，直接进入细胞发挥功能的微小RNA纳米微球，并提供了该纳米微球的制备方法及其在抗肿瘤方面的应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种微小RNA纳米微球，其特征在于：包括纳米载体和由载体包裹或吸附的体外合成的微小RNA miR-125b的反义链miR-125b-AS。

优选的，所述miR-125b的寡核苷酸序列为：

5’UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA3’；

所述miR-125b反义链，即miR-125b-AS的核酸序列为：

5’UCACAAGUUAGGGUCUCAGGGA 3’。

优选的，所述纳米载体为植物油或十二烷制备的纳米颗粒，所述植物油包括大豆油，橄榄油或其它可食用非调合油。

更进一步的，所述的微小RNA纳米微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将miR-125b-AS溶于10倍体积蒸馏水制备为RNA水溶液，RNA水溶液按体积比3:2加入植物油或十二烷，将超声探头置于水油液面分界处，反应温度为20℃，超声强度为150 W/cm²，超声时间为3 Min，采用超滤膜分离纳米微球，即得。

本发明还提供了上述的微小RNA纳米微球在抗肿瘤基因治疗药物中的应用。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：