[发明专利]基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒的层析试纸条

权利要求书

1.一种基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，其特征在于，包括：

底板(7)以及沿所述底板(7)的长度方向上依次粘附在所述底板上的样品垫(1)、结合垫(2)、抗体承载膜(3)和吸水垫(6)，且所述样品垫(1)、结合垫(2)、抗体承载膜(3)和吸水垫(6)之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠；所述抗体承载膜(3)粘附于所述底板(7)的中间部位，其上设置有相间隔的检测线(4)和质控线(5)，所述检测线(4)靠近所述结合垫(2)，所述质控线(5)靠近所述吸水垫(6)；

所述结合垫(2)上喷涂有低噪声激发式荧光染料标记的可与所述A组轮状病毒衣壳蛋白特异性结合的单克隆抗体；

所述检测线(4)由可与所述A组轮状病毒特异性结合的多克隆抗体涂层形成；所述质控线(5)由与所述轮状病毒以及所述可与A组轮状病毒特异性结合的多克隆抗体均无关的抗体涂层形成。

2.根据权利要求1所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫(2)上喷涂的所述可与A组轮状病毒特异性结合的单克隆抗体为鼠抗A组轮状病毒衣壳蛋白单克隆抗体。

3.根据权利要求1或2所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，其特征在于，形成所述检测线(4)的所述可与A组轮状病毒特异性结合的多克隆抗体为羊抗A组轮状病毒多克隆抗体。

4.根据权利要求1-3任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，其特征在于，形成所述质控线(5)的抗体为羊抗鼠IgG多克隆抗体。

5.根据权利要求1-4任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，其特征在于，所述的低噪声激发式荧光染料为发射波长为650-1000nm的荧光分子。

6.根据权利要求5所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，其特征在于，所述的低噪声激发式荧光染料为NHS活化的低噪声激发式荧光染料DyLight800。

7.一种制备权利要求1-6任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A)取以PBS缓冲液稀释10倍的所述低噪声激发式荧光染料DyLight800与所述A组轮状病毒衣壳蛋白单克隆抗体按质量比为1:4混合均匀，室温条件下避光反应2小时，随后将所得的标记产物放入含有PBS缓冲液的透析袋中，4℃透析过夜，向所述标记好的抗体溶液标记产物中添加终浓度为1.5％BSA、0.1％Tween20和叠氮化钠0.15‰，4℃保存，备用；

B)在所述结合垫(2)上喷涂以层析缓冲液稀释4000倍后的上述步骤A)中的所述标记产物，然后室温风干，备用；

C)使用含5％BSA，0.1％Tween 20的PBS缓冲液喷涂在所述样品垫(1)上，室温风干后，备用；

D)分别取所述A组轮状病毒多克隆抗体和所述与A组轮状病毒以及可与A组轮状病毒特异性结合的多克隆抗体均无关的抗体用划线机在所述抗体承载膜(3)上划所述检测线(4)和所述质控线(5)，室温风干，备用；

E)将上述步骤获得的所述样品垫(1)、所述结合垫(2)、所述抗体承载膜(3)和所述吸水垫(6)沿所述底板(7)的长度方向上依次粘附，然后切割成试纸条，即得。

8.权利要求1-6任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条在定性及定量检测轮状病毒领域中的用途。

9.一种利用权利要求1-6任一所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条检测轮状病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)以pH为7.2的PBS缓冲液稀释处理待测样品，取上清液作为待检样，另取所述PBS缓冲液作为阴性对照，分别以利用权利要求1-6任一所述的试纸条进行免疫层析检测；

b)荧光扫描所述检测线(4)和所述质控线(5)，分别测定所述检测线(4)和所述质控线(5)区域的荧光强度，若所述质控线(5)区域出现荧光发射峰，则表明该试纸条有效，反之则无效；若所述检测线(4)区域同时出现荧光发射峰则为阳性结果，反之则为阴性。

10.根据权利要求9所述的检测A组轮状病毒的方法，其特征在于，还包括制备标准曲线及定量检测的步骤：其中

所述制备标准曲线的步骤包括：取A组轮状病毒衣壳蛋白抗原配制成1-100倍梯度浓度的系列标准品；并将上述浓度系列标准品分别用所述的试纸条进行免疫层析，荧光扫描所述检测线(4)和所述质控线(5)，分别测定所述检测线(4)和所述质控线(5)区域的荧光强度，制作抗原浓度与荧光强度比之间关系的标准曲线，并拟合方程；

所述定量检测的步骤包括：取待测样品以所述的试纸条进行免疫层析检测，利用上述标准曲线及方程计算得到所述A组轮状病毒浓度。