[发明专利]一种单链抗体及其在检测硫代磷酸酯类农药残留中的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种单链抗体及其在检测硫代磷酸酯类农药残留中的应用。

背景技术：

硫代磷酸酯类农药属于有机磷农药的一类，其结构上的特点是均有硫代磷酸酯基骨架。这类化合物多呈油状或结晶状，工业品呈淡黄色至棕色，大多有蒜臭味。一般不溶于水，易溶于有机溶剂如苯、丙酮、乙醚、三氮甲烷及油类，对光、热、氧均较稳定，遇碱易分解破坏。

硫代磷酸酯类农药具有对害虫高效，防治谱广，作用方式多样，品种繁多，不同品种间毒性差异较大等特点，而被广泛应用于农业生产和卫生害虫防治领域。伴随着硫代磷酸酯类农药的广泛使用而带来的农药残留问题也日趋严重。在现实生活中，有机磷农药对人体的暴露主要来自食品、饮用水和居住环境等，其中食品是残留农药摄入人体的最重要来源，特别是长期低剂量暴露有机磷农药带来的慢性毒性问题日益受到人们的关注。有机磷农药主要通过抑制乙酰胆碱酯酶活性发挥其神经毒性作用，长期低剂量接触该类农药会对人体神经及相关行为产生负面影响。对长期接触毒死蜱的人群研究发现，人体的神经传导的速度、对振动的敏感性、视觉、嗅觉、神经行为能力等均与没有接触有机磷农药的人群有明显的差异，且情绪异常、疲劳等症状较易出现。长期低剂量暴露有机磷农药能够引起中枢神经系统高级认知功能的损伤，造成自主神经功能障碍、神经精神改变、学习记忆、语言等认知功能障碍。癌症病变发生与长期接触低剂量有机磷农药也存在一定的相关性。此外，生殖毒性也是研究者探究有机磷农药慢性毒性问题的关注点，大部分有机磷农药对精子的数量、质量均有不良影响。

有机磷农药正逐步向超高效低残留的环保型发展趋势迈进，在农产品和环境中的残留量也会很低，并且多种农药残留共存，尤其是发达国家对农产品中农药最大残留限量标准的设立十分严格。这就要求在农产品农药残留检测时，尽量排除待测样品中其他物质的干扰，采用高灵敏度的检测方法来实现。目前有机磷农药残留检测应用最为广泛的方法是仪器检测，即色谱技术，如气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)，以及在此基础上发展并得以应用的色谱-质谱联用技术等。这类检测方法具有准确性高，灵敏度好，稳定性高等特点，但是这类检测方法需要昂贵的实验仪器和专业的技术人员，使用环境也受到限制。相比传统的仪器检测方法，免疫分析方法被越来越多的应用到农药残留检测领域，其中最具代表性的方法是酶联免疫分析法(ELISA)，ELISA方法具有快速，灵敏，低成本，适合大样本高通量检测及实时检测等特点而被广泛应用于有机磷农药残留检测领域。目前国内外开发的有机磷类农药酶联免疫分析试剂盒中的抗体多采用多克隆抗体或单克隆抗体技术制备，这种制备方法费用高昂，产量低，极大的限制免疫分析方法的更广泛使用。同时被开发出的试剂盒多为检测谱单一的，只可特定检测某一种化合物或是农药，无法实现对农药残留分析的多组分平行检测。

发明内容：

本发明的目的是提高一种单链抗体及其在检测硫代磷酸酯类农药残留的应用。

本发明提供的单链抗体，是由鼠源抗体重链可变区、轻链可变区、连接肽组成的多肽；所述的重链可变区如序列表的序列1自N末端第1至119位氨基酸序列所示；所述轻链可变区如序列表的序列1自N末端第135至241位氨基酸序列所示；所述连接肽位于所述重链可变区与所述轻链可变区之间，所述连接肽如序列表的序列1自N末端第120至134位氨基酸序列所示。

所述单链抗体具体可为序列表的序列1所示的多肽。

本发明保护编码所述单链抗体的基因，由所述重链可变区编码序列、所述轻链可变区编码序列和所述重链可变区的编码序列组成。

所述的重链可变区编码序列可如序列表的序列2自5’末端第14至370位核苷酸所示；所述轻链可变区的编码序列可如序列表的序列2自5’末端第417至736位核苷酸所示。所述的连接肽编码序列可如序列表的序列2自5’末端第371至416位核苷酸所示。

所述基因具体可如序列表的序列2自5’末端第9至736位核苷酸所示的DNA分子。

含有所述编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒均属于本发明的保护范围。

所述重组载体具体可为将所述编码基因插入pCANTAB5e噬菌粒载体得到的重组质粒。更具体可为将所述编码基因插入pCANTAB5e噬菌粒载体的Sfi I和Not I酶切位点之间得到的重组质粒。

所述重组菌具体可为将所述重组质粒导入大肠杆菌得到的重组菌，更具体可为将所述重组质粒导入大肠杆菌TG1菌株或大肠杆菌HB2151菌株得到的重组质粒。