[发明专利]一种可应用于水中可生物降解有机物和微生物污染监测的混合菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种可应用于水中可生物降解有机物和微生物污染监测的混合菌剂及其制备方法，特别涉及该混合菌剂作为测试菌剂用于测定水源水和饮用水中的可生物降解有机物，能够对水质微生物污染起到监测作用，属于微生物学和环境监测领域。

背景技术

近年来，由于污染事故频发和水源水的常态污染，我国的水源水和饮用水安全正面临着严峻挑战。在此形势下，水源水和饮用水微生物污染的风险预警就显得尤为重要。当水体中可供微生物利用的有机物超过一定浓度时，就会导致微生物过度生长，从而引发微生物污染事故。

水源水和饮用水中有机物种类繁多，其中能够被异养菌无机化的部分称为可生物降解有机物。可生物降解有机物与异养细菌在水体中的生长密切相关，是研究水源水和饮用水生物稳定性所要关注的重要的指标。目前，国内外对可生物降解有机物的测定主要有两个方法：一类是在待测水样中接入特殊细菌，通过平板计数法，测定结果被称为可同化有机碳（AOC）；另一类方法通过测定水样培养前后溶解性有机碳（DOC）的差值来确定水样中可生物降解溶解性有机碳（BDOC）的值。这两种方法从接种液的准备到整个测定过程的完成，需要花费20-30天，耗时较长，使得测定结果缺乏时效性，对水质微生物污染爆发的预警作用不大。

因此，很有必要开发一种新的测定方法和相应的菌剂替代现有的测定方法，提高测定结果的时效性，加强对水质微生物污染的监测。

发明内容

本发明的目的是提供一种可应用于水中可生物降解有机物和微生物污染监测的混合菌剂，适用于对地表水、地下水、水源水和微污染水中含有的可生物降解有机物进行测定，进而预警水源水和饮用水微生物污染事故爆发的可能性。

本发明提供了一种混合菌剂，该菌剂的活性成分为克雷伯氏菌（Klebsiella sp.）、气单胞菌（Aeromonas sp.）、丛毛单胞菌（Comamonas sp.）、寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.）、不动杆菌（Acinetobacter sp.）、微杆菌（Exiguobacterium sp.）和希瓦氏菌（Shewanella sp.）的一株或几株细菌的组合，每株细菌10-100份。

该发明的混合菌剂的所有菌株均是由发明人将某生活污水处理厂二次沉淀池的活性污泥通过驯化培养后分离筛选获得的。这些菌株的具体信息如下：克雷伯氏菌（Klebsiella sp.）的保藏号为CCTCC M 2014600，气单胞菌（Aeromonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014601，丛毛单胞菌（Comamonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014602，寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014603，不动杆菌（Acinetobacter sp.）的保藏号为CCTCC M 2014604，微杆菌（Exiguobacterium sp.）的保藏号为CCTCC M 2014605，希瓦氏菌（Shewanella sp.）的保藏号为CCTCC M 2014606。

该混合菌剂可用于快速测定水样中的可生物降解有机物浓度，其检测的基本原理：通过微生物利用水体中的可生物降解有机物时消耗的溶解氧浓度与可生物降解有机物浓度成正相关的关系。通过测定已知浓度的标准碳溶液（常用乙酸碳溶液）加入一定量微生物后溶解氧浓度的变化，就可以绘制出溶解氧消耗速率与乙酸碳浓度相关的标准曲线。再将待测水样加入同等量微生物后的溶解氧消耗速率代入标准曲线拟合的方程，就可以计算出待测水样的可生物降解有机物浓度。

该混合菌剂制备的简要过程如下：（1）分别培养每株细菌；（2）离心收集菌体；（3）反复离心清洗菌体；（4）按一定比例混合菌体；（5）按比例加入冻干保护剂；（6）冷冻干燥处理（7）低温保存混合冻干菌剂。

该混合菌剂未使用时，可保存于4℃或-20℃的低温冰箱内。使用时，将其取出，加入一定体积无碳水配制的磷酸盐缓冲溶液，置于25-28℃的恒温箱1-2小时，使菌体复苏后使用。