[发明专利]一种ABO正反定型及RhD血型检测卡

说明书

技术领域

本发明涉及医学领域，尤其涉及一种ABO正、反定型及RhD血型检测卡。

背景技术

人类红细胞膜上存在很多血型抗原系统，其中以ABO血型抗原系统最重要，Rh 血型抗原系统次之。这是因为正确鉴定ABO血型是安全输血的保证，如果ABO血型不相容，则输血几乎毫无例外要发生严重的即发性溶血性输血反应症状。ABO 血型最常见的表型有四种：A、B 、AB和 O，ABO血型定型试验由正定型和反定型试验组成，正、反定型结果相符，才能正确地判断ABO血型。

而Rh 血型抗原系统中D抗原是最重要的抗原，人红细胞膜上存在D抗原，即为RhD阳性，不存在D抗原，即为RhD阴性，在输血中如果输入含有相应抗原的血液后，则会引起严重的免疫性溶血性输血反应，且IgG性质的Rh系统的抗体通过胎盘能力强，从而破坏胎儿具有与抗体对应抗原的红细胞，引发严重的新生儿溶血病，因此进行准确的Rh分型对于减少免疫性溶血性输血反应、对新生儿溶血病进行诊断、预防和治疗具有重要的临床意义。

微柱凝胶免疫检测技术是20世纪90年代产生的一种免疫检测技术，其基本原理是利用分子筛技术，离心技术和特异性免疫反应技术原理，把血型血清学技术与凝胶分子筛技术有机结合起来，可灵敏地检测出可能存在的微弱血型抗原抗体反应，被认为是血型血清学检验的里程碑。

目前国内外已有一些厂家生产ABO正、反定型及RhD血型检测卡，但是存在以下一些不足：一是采用单一型号的葡聚糖凝胶或聚丙烯葡聚糖凝胶，使得灵敏度与特异性无法兼顾；二是采用生理盐水或抗体缓冲液溶胀凝胶，使得凝胶无法充分完全溶胀，以及破坏反应体系的离子强度；三是对添加不同抗体的凝胶，凝胶洗涤缓冲液完全一致，无法有效保护抗体稳定性。

发明内容

本发明就是要克服以上不足，提供一种灵敏度高、特异型号，稳定性强、保质期长的ABO正、反定型及RhD血型检测卡。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案进行解决，一种ABO正反定型及RhD血型检测卡，包括含有六个微柱的检测卡，所述六个微柱中前三个微柱分别装有等量的抗A凝胶、抗B凝胶和抗D凝胶，其余三个微柱装有等量的空白凝胶，其通过以下方法制备而成：

（1）葡聚糖凝胶的溶胀：选用至少两种交联葡聚糖凝胶进行混合，然后加入纯化水中进行充分悬浮溶胀，再用纯化水洗涤去除破碎颗粒，得到大小均匀、呈完整球形的葡聚糖凝胶颗粒；

（2）制备各抗体稀释液：

抗A稀释液：以生理盐水为基液，其中含有乙二胺四乙酸二钾盐10-15g/L、牛血清白蛋白20-25g/L、蔗糖15-20g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；

抗B稀释液：以生理盐水为基液，其中含有乙二胺四乙酸二钾盐15-20g/L、牛血清白蛋白15-20g/L、蔗糖25-30g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；

抗D稀释液：以磷酸盐缓冲液为基液，其中含有乙二胺四乙酸二钾盐10-15g/L、牛血清白蛋白35-40g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；

空白凝胶洗涤缓冲液：以纯化水为溶剂，缓冲液中含有氯化钠1.75g-2.07g/L、磷酸氢二钠0.185-0.219g/L、磷酸二氢钠0.203-0.24g/L、甘氨酸18-21g/L；并调节 pH值为6.6-6.8；

（3）制备各抗体工作液：

取抗A单克隆抗体浓缩液与抗A稀释液进行混合，使得到的抗A单克隆抗体工作液的效价≥128；

取抗B单克隆抗体浓缩液与抗B稀释液进行混合，使得到的抗B单克隆抗体工作液的效价≥128；

取抗D单克隆抗体浓缩液与抗D稀释液进行混合，使得到的抗D单克隆抗体工作液的效价≥64；

（4）凝胶洗涤：

取六份等量的葡聚糖凝胶颗粒，其中三份分别用等量的抗A稀释液、抗B稀释液和抗D稀释液进行洗涤至少三次，再加入相对应的抗A单克隆抗体工作液、抗B单克隆抗体工作液和抗D单克隆抗体工作液进行混合，得到抗A凝胶、抗B凝胶和抗D凝胶；再将另外三份葡聚糖凝胶颗粒分别用等量的空白凝胶洗涤缓冲液进行洗涤至少三次，再加入空白凝胶洗涤缓冲液进行混合，得到三份空白凝胶；

（5）分装：

按照每管24-32微升的量，将抗A凝胶、抗B凝胶、抗D凝胶依次加到空白检测卡的前三个微柱中，将三份空白凝胶分别加到空白检测卡的后三个微柱中，形成ABO正反定型及RhD血型检测卡。