[发明专利]一种蓖麻脱毒组培快繁的方法

权利要求书

1.一种蓖麻脱毒组培快繁的方法，其特征在于：按如下步骤进行：

1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基，各培养基的组分为：

①基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，卡拉胶5～7g/L，pH6.0～7.2；

②诱导培养基：MS中添加6-BA0.5～1.5mg/L、NAA0.15～0.5mg/L和小球藻粉0.5～1.2mg/L；

③愈伤组织分化培养基：MS中添加6-BA2.5～3.0mg/L、NAA0.2～0.3mg/L和小球藻粉0.5～1.2mg/L；

④增殖培养基：MS中添加6-BAl.0mg/L和NAAO.5mg/L；

⑤生根培养基：1/2MS中添加NAAO.1mg/L和ABT生物菌生根粉O.1mg/L。

2)外植体的选取与灭菌：取蓖麻的种子，沙磨去壳后，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；

3)诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的种子接种在诱导培养基上，直接形成无根组培苗或先形成愈伤组织，再将愈伤组织移植至分化培养基诱导出丛芽，形成无根组培苗、珠芽和小块根；

4)增殖培养：将步骤3)直接形成的无根组培苗或先形成愈伤组织，再经分化培养基诱导形成的无根组培苗、珠芽和小块根接种在增殖培养基上，诱导出丛芽，形成无根组培苗、珠芽和小块根；

5)生根培养：将步骤4)增殖形成的无根组培苗、珠芽和小块根接种在生根培养基中进行生根培养；

6)移栽：当步骤5)的生根组培苗生长至8～10cm以上、生根珠芽0.5～0.7cm以上，生根小块根直径0.5～1.0cm以上，移栽基质培养至成苗；

7)病毒检测：利用RT-PCR扩增技术，构建其基因组序列克隆，原核表达制备病毒特异性的抗血清，建立ELISA检测技术进行蓖麻大豆花叶病毒、芋花叶病毒、马蹄莲花叶病毒的检测。

2.如权利要求1所述的一种蓖麻脱毒组培快繁的方法，其特征在于：所述的蓖麻种子是当年生的成熟种子，采用蓖麻种子：粗砂为1：5～8的配比混合后，中速研磨去壳，筛去粗砂，温水清洗2～3次。

3.如权利要求1所述的一种蓖麻脱毒组培快繁的方法，其特征在于：所述的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～l.0min，再用2％的次氯酸钠水溶液灭菌20～30min，最后用无菌水冲洗3～5次。

4.如权利要求1所述的一种蓖麻脱毒组培快繁的方法，其特征在于：所述的移栽基质是田土：珍珠岩：蛭石：水锈石按体积比3：1：1：0.5配制而成。