[发明专利]一种miRNA-532反义核苷酸药物组合物及其用途

说明书

技术领域：

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种内源性的非编码小RNAs的新药及用途，尤其是一种含miRNA-532反义核苷酸的药物组合物及其在预防或治疗心脏疾病中的用途。

背景技术：

心血管疾病是人类健康和生命的主要威胁，是人类健康的头号杀手，全世界每年有一千七百多万人死于心血管疾病，其死亡率已接近所有癌症死亡率的总和。随着人类生活水平日益提高和饮食结构的改变，心血管疾病死亡率呈明显上升趋势，已超过癌症成为第一大致死原因。根据近期公布的最新统计结果表明，18岁及以上居民高血压患病率为18.8％，估计全国患病人数1.6亿多，由此造成的心肌肥大、心肌梗死、冠心病、以及心力衰竭等凋亡相关心脏疾病的病人达几千万。目前关于心脏疾病发病机理尚不完全清楚，心脏疾病的预防、诊断和治疗尚不能达到让人满意的效果，急需开发新的技术方法用于心脏病的诊断和防治。miRNA是新近研究发现的一类内源性非编码小RNA分子，许多研究表明miRNA对于维持心脏正常生理功能具有重要作用，心脏中的miRNA异常表达与许多心脏疾病的发生相关。因此，将miRNA作为心脏疾病治疗的靶点，开发相关药物具有潜在的临床应用价值；单一的miRNA可以同时作用于多个靶基因的mRNA的表达，药物作用于一个miRNA可以调节多个参与心脏发病基因的表达，影响多个信号通路，从整体上达到治疗疾病的目的。由于miRNA在心脏病理状态下表达水平不同，可以通过检测miRNA的表达水平来预测诊断疾病。

细胞凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡，是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束生命的过程，是一个主动的、高度有序的、由基因控制及一系列酶参与的过程，对正常胚胎发育，维持细胞群体及恶性病变过程中均起重要作用，在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键的角色。在许多心肌损伤或心脏病理状态下，如心肌缺血再灌注损伤、心肌肥大和心力衰竭等，心肌细胞会发生凋亡。由于成熟的心肌细胞不能分裂增殖，心肌细胞过度凋亡必然会使心肌细胞数目减少，这可能是心脏疾病发病的机理。目前研究发现许多miRNA通过调控凋亡相关靶蛋白的表达参与细胞凋亡的发生，这些miRNA有促凋亡的，也有抑凋亡的。寻找心脏中特异表达的、参与心肌细胞凋亡的miRNA，阐明其作用机理，对于开发以miRNA为策略的心脏疾病的诊断和治疗具有及其重要的意义和应用前景。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点，寻求一种新型药物组合物，确定调控心 肌细胞凋亡的心脏特异性表达的miRNA及其在心肌缺血再灌、心肌梗死、冠心病、心肌肥大和心肌纤维化等心脏疾病中的用途，用于心脏疾病的诊断与防治。

为了实现上述发明目的，本发明涉及的药物组合物包括miRNA-532反义核苷酸和药学上可接受的载体、病毒或辅料；所用的miRNA-532反义核苷酸的序列为5’-ACGGUCCUACACUCAAGGCAUG-3’；所述载体为壳聚糖、胆固醇、纳米颗粒和脂质体中的一种或多种；所述病毒载体为腺病毒载体、慢病毒载体、逆转录病毒载体中的一种或多种，优选的为腺病毒载体；所述辅料为甘露醇、磷酸盐缓冲液、生理盐水中的一种或多种。

本发明中所述的药物组合物中过表达miRNA-532反义核苷酸的腺病毒载体感染滴度为10¹⁶PFU。

本发明的miRNA-532反义核苷酸药物组合物用于心肌梗死、心肌缺血损伤、心肌肥大和心肌纤维化的治疗和防治，以口服或注射方式给药；所述注射为静脉注射、肌肉注射、冠状动脉内注射或直接心肌注射。

本发明还提供一种用于预防或治疗心脏疾病的试剂盒，含有的miRNA-532反义核苷酸与载体构成药物导入体内，用于心肌梗死、心肌缺血损伤、心肌肥大和心肌纤维化的预防与治疗。

本发明通过实验发现miRNA-532在心肌缺血损伤及缺氧诱导的心肌细胞凋亡过程中表达显著上调；通过转染和注射miRNA-532反义核苷酸抑制miRNA-532的表达能够抑制心肌细胞凋亡、心肌缺血损伤和心肌梗死面积减少；通过抑制心肌细胞凋亡对心脏具有保护作用，给予miRNA-532升高miRNA-532的表达能够诱导心肌细胞凋亡和心肌缺血损伤加重。

本发明与现有技术相比，其选用的原料科学合理，制备工艺简单，药物作用明显，使用范围广，使用安全可靠，应用环境友好。

附图说明：

图1为心肌缺血损伤及缺氧处理(Anoxia)的心肌细胞凋亡过程中miRNA-532表达水平的变化图；