[发明专利]一种针对SEA的纳米抗体及其编码序列与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术或生物医学领域，涉及一种针对于日本血吸虫可溶性虫卵抗原（Soluble Egg Antigen， SEA）的纳米抗体、其编码序列及应用。

背景技术

血吸虫广泛分布于世界各地，尤其是发展中国家。有五种血吸虫可以感染人体并引起人体的血吸虫病。在我国以日本血吸虫为主，日本血吸虫虫卵的沉积可引起血管的堵塞、组织坏死、肉芽肿反应和组织纤维化，因此虫卵在日本血吸虫对人体的致病过程中有着重要的作用。对于血吸虫病的研究，发展理想的诊断试剂和疫苗是两个主要方面。最初，血吸虫病的诊断方法以常规粪检为主的病原学检查，这种方法因工作量大、漏检率高，不能满足疫情检测的需要；目前虫卵抗原用于临床检测是诊断血吸虫病的主要方法之一。Dunne D等在《美国热带医学与卫生杂志》(Am J Trop Med Hyg 1988；38:508)中报道，将可溶性虫卵抗原(SEA)用阳离子交换色谱法分离纯化得到纯化片段虫卵抗原，而纯化的虫卵抗原是导致环卵沉淀现象产生的重要成分之一，目前主要用于曼氏血吸虫病的诊断。但是，目前虫卵抗原主要是用实验动物来制备的，这样要耗费大量的动物，因此制备成本高，且制备方法较为烦琐。

纳米抗体技术，是在传统抗体的基础上，运用分子生物学技术研发得到，是目前已知最小的可结合抗原的抗体分子。最初有比利时科学家Hamers.R在骆驼血液中发现，普通的抗体蛋白由两条重链和两条轻链组成，而从骆驼血液中发现的新型抗体只有两条重链，没有轻链，这些新型抗体能像正常抗体一样于抗原紧密结合，但不像单链抗体那样相互粘连聚集成块。以其为基础构建的纳米抗体不仅分子量为普通抗体的1/10，而且化学性质也更加灵活，稳定性好，可溶性高，表达容易且容易获得，并能够偶联其他分子，因此应用纳米抗体技术研发血吸虫检测试剂具有广阔的应用前景。本发明正是利用该技术，利用筛选得到的日本血吸虫虫卵抗原特异的纳米抗体，用于检测血吸虫感染。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种针对日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码序列及该纳米抗体在制备检测的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种针对SEA的纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，所述框架区FR包括FR1～FR4的氨基酸序列：其中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1 所示，FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：3 所示的，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5 所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO：7 所示；所述互补决定区CDR包括CDR1～CDR3的氨基酸序列：CDR1的氨基酸序列SEQ ID NO：2 所示，CDR2的氨基酸序列SEQ ID NO：4 所示，CDR3的氨基酸序列SEQ ID NO：6 所示。

进一步的，所述的SEA的纳米抗体的VHH链，它具有SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列。

一种SEA纳米抗体，它针对SEA表位的纳米抗体，包括两条具有SEQ ID NO：9所示氨基酸序列的VHH链。

一种DNA分子，它编码选自下组的蛋白质：上述的针对SEA的纳米抗体的VHH链，或上述的SEA纳米抗体。

一种表达载体，它含有SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。

一种宿主细胞，它可以表达SEA纳米抗体。

一种SEA纳米抗体在制备SEA检测试剂方面的应用。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点如下：本发明首先制备及纯化日本血吸虫虫卵抗原，将其免疫骆驼，制备SEA特异的纳米抗体库，然后将纯化后的SEA偶联在酶标板上，利用噬菌体展示技术筛选高表达的SEA特异的纳米抗体，并将其转入大肠杆菌TG1，建立能在大肠杆菌TG1中高效表达的纳米抗体株。

附图说明

图1 是纳米抗体的DNA电泳图，M 分子量marker，1 PCR产物，条带约600bp，1-13为SEA纳米抗体；N为阴性对照；

图2是血吸虫SEA特异的纳米抗体，经镍柱亲和层析纯化后再经AKTAexpress纯化后的SDS-PAGE电泳图（A）和Western blot印迹图（B），其中M为分子量标记，单位kD，1-6表示 SEA纳米抗体；

图3是应用SEA纳米抗体识别血吸虫SEA的酶联免疫吸附试验（ELISA）结果。图中“▲ ”曲线为SEA纳米抗体，“ ■”曲线为阴性对照抗体VSG。

具体实施方式