[发明专利]几株可用于水中可生物降解有机物和微生物污染监测的细菌

说明书

技术领域

本发明涉及将生活污泥经驯化培养后分离出的几株细菌，能够应用于水中可生物降解有机物和微生物污染的监测，属于微生物学和环境监测领域。

背景技术

近年来，由于污染事故频发和水源水的常态污染，我国的饮用水安全正面临着严峻挑战。在此形势下，饮用水微生物污染的风险预警就显得尤为重要。当水体中含有的可同化有机碳（Assimilable Organic Carbon，AOC）超过一定浓度时，会导致微生物过度生长，从而引发微生物污染事故。因此，AOC是水质监测中的一个重要指标，通过测定水中AOC的水平来间接反映水体的微生物污染风险。现有常用于测定水样AOC的菌株为P17和NOX，NOX生长较慢，P17和NOX必须分开计数，使得整个检测过程耗时长，所获得结果对水质监测风险预警很难起到指导作用。由于只有两株菌株，其底物谱有限，不能够完全利用水样中的各种AOC，导致其测定结果也并不十分准确。

因此，有必要筛选几株底物谱范围较广泛，生长速度较快的菌株，用于替代P17和NOX，从而简化AOC测定实验的操作步骤，缩短测定时间，提高测定结果的准确性。

发明内容

本发明的目的在于筛选几株底物谱范围较广泛，生长速度较快的细菌，用于替代P17和NOX，从而简化AOC测定的操作过程，缩短测定时间，提高测定结果的准确性。

这几株筛选的细菌在应用于水样AOC测定时，选取其中三株或三株以上的组合就可以到达较好的测定结果。

本发明的优点在于，筛选的几株细菌与P17和NOX相比，菌株种类更多，具有更广泛的AOC底物谱，生长速度更快，所需培养时间更短，操作步骤更加简单，测定结果更加准确。

本发明涉及的几株细菌保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是武汉市武汉大学，保藏日期为2014 年11月27日，其保藏编号具体为：克雷伯氏菌（Klebsiellasp.）的保藏号为CCTCC M 2014600，气单胞菌（Aeromonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014601，丛毛单胞菌（Comamonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014602，寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014603，不动杆菌（Acinetobacter sp.）的保藏号为CCTCC M 2014604，微杆菌（Exiguobacterium sp.）的保藏号为CCTCC M 2014605，希瓦氏菌（Shewanellasp.）的保藏号为CCTCC M 2014606。

.本发明的几株细菌是采用以下过程筛选获得的：

（1）采集活性污泥：从生活污水处理厂二次沉淀池中采集活性污泥；

（2）驯化培养：将活性污泥接入灭菌的乙酸碳溶液，25-28℃恒温培养3-5天；

（3）菌种分离筛选：将培养的菌液稀释涂布在平板上，25-28℃恒温培养1-1.5天；

（4）.鉴定菌株：从平板上挑取单菌落，对菌株进行鉴定。

鉴定结果如下：

具体实施方式

以下结合具体的实施例对本发明的几株细菌的应用，进行进一步详细描述。

实验步骤：

1.将筛选的几株细菌中的7株细菌均取一环，先接入天然水样培养，再接入乙酸碳溶液培养后，制备成接菌液；

2.无碳化处理所有实验所用的器皿和枪头；

3..配制矿物质盐溶液和3mM磷酸盐缓冲溶液；

4.预处理待测水样，将待测水样过滤处理后，加入矿物质盐溶液和3mM磷酸盐缓冲溶液，按一定倍数将待测水样稀释；

5.配制标准乙酸碳溶液：用浓度较高的乙酸碳母液，加入矿物质盐溶液和3mM磷酸盐缓冲溶液，配制成100μg C/L乙酸碳溶液作为产率对照组。同时，用无碳水配制0μg C/L的碳溶液作为空白对照组；

6.分装、灭菌：将待测水样、产率对照组溶液和空白对照组溶液各取30mL加入无碳化处理的50mL三角瓶，巴氏消毒水样，冷却待用；

7.接种、培养：将接菌液接入巴氏消毒的水样中，25-28℃恒温培养3天；

8.平板计数：将培养的水样按一定比例稀释后涂布于平板上，25-28℃恒温培养，1-1.5天后计数；