[发明专利]一种用于检测转移性结直肠癌化疗疗效和/或预后的生物标志物组合及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测转移性结直肠癌化疗疗效和/或预后的生物标志物组合及其应用。

背景技术

结直肠癌是一种原发于大肠的恶性肿瘤，包括结肠癌和直肠癌。结直肠癌因其发部位不同而表现出不同的临床症状及体征，主要有腹痛、便血、腹部包块、肠梗阻等，伴或不伴贫血、发热和消瘦等全身症状。在我国，结直肠癌作为第三大肿瘤，其发病率及死亡率近年来逐年上升。由于诊断技术的不断提高，使新发结直肠癌病例中非转移性疾病的比例大大增加，对于这部分患者，外科手术及辅助化疗是主要治疗手段。但是目前尚缺乏有效的预后判断及化疗疗效评价指标。目前临床上主要依据基于临床病理指标(如肿瘤大小、淋巴结转移数目、远处转移、组织分级等)的TNM分期作为疾病预后的判断及指导临床治疗，但根据此分期判断患者预后存在较大的异质性，亦不能预测肿瘤患者对化疗的反应。

研究表明Ⅱ、Ⅲ期结直肠癌患者经过标准治疗后仍有20％‐30％出现复发,其中40‐50％复发发生在原发灶切除后一年内，80％复发发生在原发灶切除三年内，复发后5年生存率低于1％。约有50％结直肠癌患者最终会进展为转移性疾病而死亡。转移性结直肠癌患者仅有极少数可以经手术及化疗而得到治愈，全身化疗是这类患者的主要治疗方法，以氟尿嘧啶药物为基础联合奥沙利铂或者伊立替康方案已成为晚期结直肠癌的标准治疗方案。此外，近年来抗血管生成药物(贝伐珠单抗)或表皮生长因子单抗(西妥昔单抗或帕尼单抗)联合标准化疗使有效率进一步提高，但有相当一部分病人在治疗时出现化疗药物耐药甚至开始即出现不敏感最终因疾病进展而死亡。因此，筛选出对化疗敏感的人群在临床实践中显得尤为重要，可使化疗无效人群避免不必要的毒副作用及承担巨大的经济负担，但至今尚没有有效的手段用于化疗药物敏感人群的选择，寻求有效的标志物用于化疗敏感性指标具有极大的应用前景。

微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长约19至23个核苷酸的非编码单链小核糖核酸分子,其主要功能是参与基因转录后水平调控。miRNA通过与靶mRNA 3’端非翻译序列完全或部分互补结合,导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制从而调控靶基因的表达。miRNA参与1/3人类蛋白编码基因调控，它与多种生理活动有关，如生长发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化等；也与许多疾病的发生发展密切相关，如糖尿病、心血管疾病、肿瘤等。最近的研究显示^[1-3]，miRNA在肿瘤发生、发展过程中发挥抑癌基因或癌基因样作用。已证实，肿瘤组织和肿瘤细胞中的某些miRNA表达水平发生了变化，相对于正常组织，一些miRNA表达量显著上升或下降。许多癌组织如肺癌、乳腺癌和食管癌等组织都有若干组织特异性miRNA的表达，提示miRNA有肿瘤组织特异性。另外，miRNA的表达也与肿瘤分化程度以及预后有关。最近，大量的研究结果揭示，miRNA在血清中能长期稳定存在，耐RNA酶的降解，一些肿瘤包括非小细胞肺癌、结直肠癌、前列腺癌、卵巢癌和胰腺癌患者血清中miRNA表达谱与正常人有显著差异，均有各自特异的表达谱，同时这种变化还可见于早期癌中。这种稳定存在于血清中的循环miRNA因其用于肿瘤等疾病的早期诊断、预后及疗效判断从而指导个体化治疗显示出潜在的临床应用前景。

目前尚没有利用无创伤性、取材方便的血液标本检测与转移性结直肠癌化疗疗效及预后生物标志物相关的特异性miRNA组合及检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的就在于通过对患者接受化疗前的血清样本miRNA进行检测和比对，分析miRNA表达水平与化疗敏感性的关系，联系患者的生存资料及治疗效果，筛选一组与转移性结直肠癌化疗疗效及预后相关的血清miRNA，并利用这些miRNA的TaqMan探针制备出适用于临床诊疗用途的试剂盒，为预测转移性结直肠癌患者化疗敏感性提供特异性的以及迅速的无创伤性检测手段。

以下是对本发明的进一步描述：

一种用于检测转移性结直肠癌化疗疗效和/或预后的miRNA组合，其包括下列miRNA：miR‐135b及miR‐208b。

上述miRNA组合的筛选方法包括以下步骤(见图1)：

(1)分别收集12例对奥沙利铂(FOLFOX)敏感和不敏感患者化疗前混合血清样本，提取总RNA；

(2)采用高灵敏度、高精确性和高重复性的低密度芯片技术(TaqMan low density Array technology)进行miRNAs检测，筛选在化疗敏感组(PR+SD)及不敏感组(PD)间稳定差异表达的一组miRNA；