[发明专利]Boc和Fmoc固相肽合成

说明书

本申请是发明人于2007年8月31日提交的题为“Boc和Fmoc固相肽合成”的中国专利申请200780043049.3的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种制备包含三个或更多个氨基酸残基的肽的方法，所述肽具有N-端氨基酸、邻近该N-端氨基酸的倒数第二个氨基酸和C-端氨基酸。

背景技术

为了克服与溶液肽合成有关的许多中间体提纯问题，于1963年引入固相肽合成。Stewart等人，固相肽合成(Solid Phase Peptide Synthesis)(百克化学公司(Pierce Chemical Co.)，第2版，1984)。在固相合成期间，氨基酸被组装(即，偶联)成任何想得到的序列的肽，而链的一端(即，C-端)被锚定到不能溶解的载体上。一旦在载体上将想得到的序列连接到一起，那么肽就被从载体中解封闭(deblock)(即，裂开(cleave))。偶联氨基酸的α-氨基官能团的这两个标准保护基团为通过利用强酸处理而除去的Boc，以及利用碱除去的Fmoc。本发明涉及一种利用这些α-氨基保护基团两者的组合，以单一合成，在便宜的氯甲基化的聚苯乙烯树脂上制备肽的便利方法。

在通过利用任一种上面提及的α-氨基保护方案的固相方法合成肽的设计中，重要的是在整个链组装期间保护构成氨基酸的任何反应性“侧基”不发生不希望的化学反应。还希望选择来保护各种侧基的化学基团可耐受被用来除去α-氨基保护基团的试剂除去。第三，重要的是在链组装期间生长中的肽链与树脂颗粒的连接对于用来除去任一类型α-氨基保护基团的试剂稳定。在Fmocα-氨基保护方案的情况下，侧基保护官能团应当可耐受用来除去Fmoc的碱性试剂。实际上，在肽链组装之后，这些侧链保护基团一般由温和酸性试剂除去。当利用Bocα-氨基保护方案时，侧链保护基团必须在每一个循环中都可耐受被用来脱保护Boc基团的温和酸试剂除去。实际上，在肽链组装之后，Bocα-氨基保护方案的这些侧链保护基团一般由无水HF除去。因此，实际上，就Fmocα-氨基保护而言常用的侧链保护基团在用于Bocα-氨基脱保护的条件下不稳定，并且这两个类型的α-氨基保护方案未在通过固相肽合成的肽链的组装中混合。另外，尽管就Boc保护的氨基酸而言广泛地使用了用于肽合成的最不昂贵的聚合树脂，氯甲基化的苯乙烯或“Merrifield树脂”，但是文献暗示就在α-氨基上的Fmoc保护而言由于其在碱性条件下的不稳定性而不适于使用。(参见Stewart等人，固相肽合成(百克化学公司，第2版，1984)。本发明涉及在某些肽的固相合成期间在“Merrifield树脂”上混合使用Boc和Fmoc氨基酸两者的方法。

(兰瑞肽)为生长抑素的类似物并且已知抑制生长激素释放以及抑制胰岛素、胰高血糖素和胰腺外分泌。

美国专利号4853371公开并要求保护其制备方法及抑制生长激素、胰岛素、胰高血糖素的分泌和胰腺外分泌的方法。

美国专利号5147856公开了治疗再狭窄的用途。

美国专利号5411943公开了用于治疗肝细胞瘤的用途。

美国专利号5073541公开了用于治疗肺癌的用途。

于1993年7月9日提交的美国申请号08/089410公开了用于治疗黑色素瘤的用途。

美国专利号5504069公开了用于抑制实体瘤加速生长的用途。

于1997年5月13日提交的美国申请号08/854941公开了用于降低体重的用途。

于1997年5月13日提交的美国申请号08/854943公开了用于治疗胰岛素抵抗和综合征X的用途。

美国专利号5688418公开了用于延长胰腺细胞生存的用途。

PCT申请号PCT/US97/14154公开了用于治疗纤维化的用途。

于1997年5月13日提交的美国申请号08/855311公开了用于治疗高脂血症的用途。

于1995年5月12日提交的美国申请号08/440061公开了用于治疗血淀粉酶过多(hyperamylinemia)的用途。

于1997年5月7日提交的美国申请号08/852221公开了用于治疗高催乳素血症和催乳素瘤的用途。

前面的专利和专利申请的内容并入本文中作为参考。

发明内容

本发明特征在于一种用于制备包含三个或更多个氨基酸残基的肽的方法，该肽具有N-端氨基酸、邻近该N-端氨基酸的倒数第二个氨基酸和C-端氨基酸，其中所述方法包括如下步骤：