[发明专利]一种基于金铜纳米线-三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯构建的生物传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于金铜纳米线-三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯构建的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；

（2）在电极表面滴加6 μL浓度为1 ~ 2 mg/mL的金铜纳米线与三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯复合物水溶液，干燥；

（3）继续将6 μL浓度为8 ~ 12 μg/mL的癌胚抗原检测抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（4）用3 μL浓度为5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（5）将6 μL浓度为0.000001 ~ 1 ng/mL的一系列不同浓度的癌胚抗原用于和检测抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净，于4℃冰箱中储存备用。

2. 根据权利要求1所述的制备方法制备的一种基于金铜纳米线-三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯构建的生物传感器的制备方法，所述金铜纳米线与三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯复合物的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯的制备

将0.3 ~ 0.6g的石墨粉和1.8 ~3.6 g高锰酸钾放入三口瓶中，加入40 ~ 80 mL体积比为9：1混合的硫酸和磷酸混合液，50℃下反应12 h，倾倒至40 ~ 80 mL的冰上，加入300 ~ 600 μL的过氧化氢，缓慢磁力搅拌0.5 h，离心，分别用盐酸、乙醇、乙醚离心洗涤，35℃真空干燥，制得棕黄色氧化石墨烯固体粉末，在10 mL无水乙醇中分散0.1 ~ 0.2 g氧化石墨烯，超声5 h，加入0.2 ~ 0.4 mL三巯丙基三乙氧基硅烷，70℃回流1.5 h，离心洗涤，35℃真空干燥，制得黑色粉末为三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯；

（2）金铜纳米线与三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯复合物的制备

将40 ~ 80 mL浓度为5 mmol/L的氯金酸、40 ~ 80 mL浓度为5 mmol/L的氯化铜溶液、1 ~ 2 mg 柠檬酸钠、10 ~ 20 mL浓度为0.3 mg/mL的曲拉通X-100和20 ~ 40 mL新鲜制备的浓度为60 mmol/L硼氢化钠溶液在室温下混合，磁力搅拌2 min，静止1 h，离心后，分别用乙醇和超纯水清洗，分散于40 ~ 80 mL超纯水中，得到金铜纳米线水溶液，将0.1 ~ 0.2 mg三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯加入到20 ~ 40 mL金铜纳米线水溶液中，震荡12 h，离心分离，真空下干燥，得到金铜纳米线与三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯复合物。

3. 如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于金铜纳米线-三巯丙基三乙氧基硅烷化石墨烯构建的生物传感器，其特征在于，用于癌胚抗原的检测，检测步骤如下：

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；

（2）选择计时电流法对癌胚抗原进行检测，将输入电压设置为-0.4 V，取样间隔设置为0.1 s，运行时间设置为400 s；

（3）当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL浓度为5 mol/L的双氧水溶液，然后记录电流随时间的变化，绘制工作曲线；

（4）将待测样品溶液代替癌胚抗原标准溶液进行检测。