[发明专利]一种基于花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料构建的生物传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料构建的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；

（2）以质量分数为1% 的2 mL氯金酸溶液为底液，在-0.2 V电压下扫描30 s，得到电沉积金纳米颗粒修饰的电极；

（3）将6 μL浓度为8 ~ 12 μg/mL的人免疫球蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（4）用3 μL浓度为5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（5）将6 μL浓度为0.00002 ~ 5 ng/mL的一系列不同浓度的人免疫球蛋白用于和捕获抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净；

（6）将6 μL浓度为1 ~ 3 mg/mL的花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料标记的人免疫球蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净，于4℃冰箱中储存备用。

2.如权利要求1所述的一种基于花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料构建的生物传感器的制备方法，所述花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料标记的人免疫球蛋白检测抗体溶液的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料的制备

将15 ~ 30 mL浓度为0.01 mol/L的硝酸锌溶液加入到15 ~ 30 mL浓度为0.01 mol/L六亚甲基四胺溶液中，搅拌均匀后加入1 ~ 2 mL浓度为0.005 mol/L的柠檬酸三钠溶液，将该混合溶液转入聚四氟乙烯高压反应釜中，95℃下反应1 h，冷却到室温，用超纯水离心洗涤后真空干燥，得到花状纳米氧化锌微球，取0.1 ~ 0.2 g花状氧化锌纳米微球，加入到10 ~ 20 mL无水乙醇中，加入0.1 ~ 0.2 mL的三氨丙基三乙氧基硅烷，将该混合溶液于70℃下反应1.5 h，冷却到室温，用无水乙醇离心洗涤后真空干燥，得到氨基化的花状纳米氧化锌微球；

将50 ~ 100 mL超纯水、0.25 ~ 0.5 mL质量分数为1%的氯金酸溶液和2.5 ~ 5 mg氯钯酸钾在三口烧瓶中混合，加热煮沸后，快速加入3 ~ 6 mL质量分数为2%的柠檬酸钠水溶液，煮沸10 min，冷却到室温，得到金钯纳米花，向20 ~ 40 mL的金钯纳米花溶液中加入10 ~ 20 mg的氨基化的花状纳米氧化锌微球，震荡12 h，离心洗涤，真空干燥后，得到花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料；

（2）花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料标记的人免疫球蛋白检测抗体溶液的制备

将1 mL浓度为1 ~ 2 mg/mL的花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料溶液与1 mL浓度为5 ~ 15 μg/mL人免疫球蛋白检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤，将得到的花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料标记的人免疫球蛋白检测抗体孵化物分散于1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料标记的人免疫球蛋白检测抗体溶液，于4℃冰箱中储存备用。

3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于花状纳米氧化锌微球和金钯纳米花复合材料构建的生物传感器，其特征在于，用于人免疫球蛋白的检测，检测步骤如下：

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；

（2）选择计时电流法对人免疫球蛋白进行检测，将输入电压设置为-0.4 V，取样间隔设置为0.1 s，运行时间设置为400 s；

（3）当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL浓度为5 mol/L的双氧水溶液，然后记录电流随时间的变化，绘制工作曲线；

（4）将待测样品溶液代替人免疫球蛋白标准溶液进行检测。