[发明专利]可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质及其应用

权利要求书

1.一种可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质，其特征在于：通过将Strep-tag多肽标记的生物分子固定于负载有Strep-Tactin蛋白的基质上得到。

2.根据权利要求1所述的可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质，其特征在于：

所述的Strep-tag多肽包括Strep-tag I、Strep-tag II及其相关的衍生物和类似物；

所述的生物分子为对细胞、蛋白、核酸、生物小分子进行特异性识别和捕获的蛋白或核酸，包括抗体、链霉亲和素、凝集素、生长因子、核酸适配体。

3.根据权利要求1所述的可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质，其特征在于：所述的Strep-tag多肽标记的生物分子为偶联Strep-tag多肽的生物分子。

4.根据权利要求1所述的可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质，其特征在于：

当生物分子为抗体时，Strep-tag多肽标记的抗体通过包含如下步骤的方法制备得到：通过高碘酸钠或高碘酸钾将抗体Fc端的糖残基氧化成醛基后与Strep-tag多肽上的氨基反应得到Strep-tag多肽标记的抗体；

当生物分子为除抗体外的生物分子时，所述的Strep-tag多肽标记的生物分子通过包含如下步骤的方法制备得到：通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺活化链霉亲和素、凝集素、生长因子或核酸适配体的羧基，再与Strep-tag多肽的氨基反应得到Strep-tag多肽标记的生物分子。

5.根据权利要求1所述的可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质，其特征在于：所述的负载有Strep-Tactin蛋白的基质为商品化负载有Strep-Tactin的磁珠或商品化含Strep-Tactin的树脂球、孔板，或将Strep-Tactin蛋白修饰于其他基质上。

6.根据权利要求1所述的可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质，其特征在于：所述的可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质中的生物分子为链酶亲和素时，将另外一种生物分子生物素化后通过与链酶亲和素的作用固定在负载有Strep-Tactin蛋白的基质上。

7.权利要求1-6任一项所述的可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质在细胞的捕获及释放中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：当生物分子为抗体，在制备多肽标记的抗体衍生化基质用于细胞的捕获和释放时，通过以下两种方式：1）先将二抗通过高碘酸钠或高碘酸钾氧化，然后与Strep-tag多肽连接获得多肽标记的二抗，再通过二抗与一抗的作用固定用于细胞识别的一抗；2）直接将一抗通过高碘酸钠或高碘酸钾氧化，然后与Strep-tag多肽连接获得多肽标记的一抗，用于细胞的捕获。

9.权利要求1-6任一项所述的可逆组装和分解的Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质用于细胞的捕获及释放的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将Strep-tag多肽标记的生物分子衍生化基质与细胞混合，孵育后分离，提取特异性捕获细胞的基质；

（2）将特异性捕获细胞的基质与生物素或其衍生物混合，孵育后分离，提取释放后的细胞进行后续分析。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述的Strep-tag多肽标记的生物分子为Strep-tag多肽标记的抗体时，包括如下步骤：

（1）将5～1000μg/mL的抗体与20mM高碘酸钠或高碘酸钾按照体积比1:1混合，孵育0.5～2小时后，将所得物超滤洗涤，提取氧化的抗体；

（2）将0.1～100mg/mL的Strep-tag多肽与步骤（1）得到的氧化的抗体按照摩尔比1～50:1混合，孵育0.5～8小时后，将所得物超滤洗涤，提取Strep-tag多肽标记的抗体；

（3）将0.1～100mg/mL步骤（2）得到的Strep-tag多肽标记的抗体与浓度为0.1～200mg/mL的商品化负载有Strep-Tactin的磁珠按照体积比1:0.1～50混合并孵育0.5～8小时后，将所得物洗涤分离，提取Strep-tag多肽标记的抗体衍生化磁珠；

（4）将Strep-tag多肽标记的抗体衍生化磁珠与细胞混合，孵育5～45min后分离，提取特异性捕获细胞的磁珠；

（5）将特异性捕获细胞的磁珠与生物素或其衍生物混合后，孵育5～45min，提取释放后的细胞进行后续分析。