[发明专利]一种利用角质颚鉴定头足类日龄的方法

权利要求书

1.一种利用角质颚鉴定头足类日龄的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)裁剪：取出头足类角质颚的上颚，切割上颚分成两半，选取包埋半个角质颚，将角质颚喙部剪下；

(2)放置：将步骤(1)中剪下的角质颚喙部放置于模具的凹槽中；

(3)树脂包埋：按1:1～1:1.5的体积比将压克力粉和液体固化剂配置成的冷埋树脂溶液，倒入模具中，使溶液覆盖模具，包埋步骤(2)所述的角质颚喙部，放置室温避光处待其硬化；

(4)切割：将包埋硬化后的树脂以角质颚喙部切割面为中心，切割成树脂薄片，并使研磨面平行于角质颚喙部切割面；

(5)固定：将所述树脂薄片沿平行于角质颚喙部切割面的方向固定在载玻片上；

(6)打磨：将固定在载玻片上的树脂薄片打磨，先粗磨至角质颚喙部表面，再细磨至接近角质颚喙部中心处；

(7)抛光：将经打磨的树脂薄片抛光研磨面，除去油质和杂质，完成所述树脂薄片一面的研磨；

(8)将固定有经抛光的树脂薄片的载玻片在热水中浸泡直至树脂软化，取下树脂薄片，干燥后，将树脂薄片翻面，固定在载玻片上，重复上述的研磨和抛光过程，至角质颚喙部中心面的生长纹清晰可见，得到角质颚喙部切片；

(9)生长纹计数：沿生长纹垂直的方向计数喙部背侧和背侧边缘的生长纹的数目，生长纹数目即为头足类的日龄；

在所述步骤(9)中的生长纹计数为：

(1)图片制作：将制作好切片置于载玻片上，用胶头滴管滴上清水，再盖上盖玻片；在连接有CCD的显微镜100×倍下对角质颚整个喙部的生长纹进行拍照，在400×倍下对角质颚喙部顶端进行拍照；用图像处理软件，对两个倍数下所拍的图片分别进行拼图处理；

(2)生长纹计数：先对100×倍下采集的图像由喙部后端向前端，始终沿生长纹垂直的方向计数喙部背侧的生长纹的数目，直至喙部背侧边缘处；然后对边缘处400×倍下采集的图像继续计数生长纹数目。

2.根据权利要求1所述利用角质颚鉴定头足类日龄的方法，其特征在于，在所述步骤(1)剪裁之前，对角质额进行预处理，其预处理的步骤为：

(1)提取：从头足类的口球内的取出角质颚；

(2)清洗：对取出后的角质颚洗净；

(3)浸泡：洗净的角质颚用75％的酒精浸泡保存待用。

3.根据权利要求1所述利用角质颚鉴定头足类日龄的方法，其特征在于，在所述步骤(1)中的裁剪为用带有刀片的手持切割机沿角质颚喙部顶端至头盖后缘切割成两半，选取包埋半个角质颚，再将角质颚喙部剪下。

4.根据权利要求1所述利用角质颚鉴定头足类日龄的方法，其特征在于，在步骤(2)中所述放置为将角质颚喙部切割面朝下平放于模具的凹槽当中。

5.根据权利要求1所述利用角质颚鉴定头足类日龄的方法，其特征在于，在步骤(4)中所述树脂薄片的厚度为2-3mm。

6.一种头足类角质颚生长纹的观察与计数方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)图片制作：将制作好切片置于载玻片上，用胶头滴管滴上清水，再盖上盖玻片；在连接有CCD的显微镜100×倍下对角质颚整个喙部的生长纹进行拍照，在400×倍下对角质颚喙部顶端进行拍照；用图像处理软件，对两个倍数下所拍的图片分别进行拼图处理；

(2)生长纹计数：先对100×倍下采集的图像由喙部后端向前端，始终沿生长纹垂直的方向计数喙部背侧的生长纹的数目，直至喙部背侧边缘处；然后对边缘处400×倍下采集的图像继续计数生长纹数目；

所述切片的制备方法包括如下步骤：

(1)裁剪：取出头足类角质颚的上颚，切割上颚分成两半，选取包埋半个角质颚，将角质颚喙部剪下；

(2)放置：将步骤(1)中剪下的角质颚喙部截面向下放置于模具的凹槽中；

(3)树脂包埋：按1:1～1:1.5的体积比将压克力粉和液体固化剂配置成的冷埋树脂溶液，倒入模具中，使溶液覆盖模具，包埋步骤(2)所述的角质颚喙部，放置室温避光处待其硬化；

(4)切割：将包埋硬化后的树脂以角质颚喙部切割面为中心，切割成树脂薄片，并使研磨面平行于角质颚喙部切割面；

(5)固定：将所述树脂薄片沿平行于角质颚喙部切割面的方向固定在载玻片上；

(6)打磨：将固定在载玻片上的树脂薄片打磨，先粗磨至角质颚喙部表面，再细磨至接近角质颚喙部中心处；

(7)抛光：将经打磨的树脂薄片抛光研磨面，除去油质和杂质，完成所述树脂薄片一面的研磨；

(8)将固定有经抛光的树脂薄片的载玻片在热水中浸泡，取下树脂薄片，干燥后，将树脂薄片翻面，固定在载玻片上，重复上述的研磨和抛光过程，至角质颚喙部中心面的生长纹清晰可见，得到角质颚喙部切片；

在步骤(1)剪裁之前对角质额进行预处理步骤为，包括如下步骤：

(1)提取：从头足类的口球内的取出角质颚；

(2)清洗：对取出后的角质颚洗净；

(3)浸泡：洗净的角质颚用75％酒精浸泡保存待用；

在所述步骤(1)中的裁剪为用带有刀片的手持切割机沿角质颚喙部顶端至头盖后缘切割成两半，选取包埋半个角质颚，再将角质颚喙部剪下。