[发明专利]蒿属植物中单体奇蒿黄酮的提取方法及其在制备抑制金黄色葡萄球菌药物中的应用

权利要求书

1.蒿属植物中单体奇蒿黄酮的提取方法，按照下述步骤进行：

A、制备总粗提物

将中药奇蒿粉碎，取奇蒿粉末10～50kg，加入70％的乙醇水溶液100～500L，加热70℃回流提取2h，将提取液减压浓缩，得总粗提取物；

B、分离纯化

将步骤A制得的总粗提取物加水溶解，使其混悬，得提取物混悬液，加入石油醚萃取三次，弃去三次石油醚萃取液，得到经石油醚萃取后的提取物混悬液；再向经石油醚萃取后的提取物混悬液中加入氯仿萃取三次，合并三次萃取液，减压回收溶剂得氯仿部位浸膏；

将氯仿部位浸膏上硅胶柱色谱，用石油醚-二氯甲烷-甲醇-甲酸系统以8:2:1:0.1、6:2:1:0.1、4:2:1:0.1、2:2:1:0.1、1:1:1:0.1进行梯度洗脱，每个梯度20L，流速为3滴/秒，各流分接样体积1L，通过薄层层析法对各流分进行点样，合并相同极性的流分，按极性差别从小到大共得到7个部分洗脱液Fr1～Fr7，其中Fr5部分为2:2:1:0.1洗脱部分流分，该流分在极性为1:2:1:0.1的石油醚-二氯甲烷-甲醇-甲酸展开剂系统中，Rf值为0.4～0.6的流分合并所得；

Fr5用Sephadex G-20凝胶柱色谱分离，用氯仿：甲醇＝1:1溶液2L等度洗脱，流速为6秒/滴，每份样品接100ml，分别得组分Fr5a～Fr5n，经薄层层析点样法，将含有奇蒿黄酮样品组分Fr5g～Fr5j合并到Fr5g；

合并后的Fr5g用反相高效液相制备，制备条件为色谱柱Kromasil C18，250mm×21.2mmi.d.；5μm；流动相比例为乙腈：0.2％甲酸水＝52:48，流速20ml/min，柱温25℃，检测波长250nm，根据检测器谱图上显示，时间段在41min到46min内接收流分，得到奇蒿黄酮5,7-二羟基-6,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮。

2.根据权利要求1所述的蒿属植物中单体奇蒿黄酮的提取方法，其特征在于：其中在步骤B中Fr5还可采用如下制备方法，制备步骤为：将氯仿部位浸膏上硅胶色谱柱，用石油醚-二氯甲烷-甲醇-甲酸系统以4:2:1:0.160L和2:2:1:0.120L进行梯度洗脱，流速为3滴/秒，各流分接样体积1L，通过薄层层析法对2:2:1:0.1洗脱的各流分进行点样，在极性为1:2:1:0.1的石油醚-二氯甲烷-甲醇-甲酸展开剂系统中，Rf值为0.4～0.6的流分进行合并，减压回收溶剂得到Fr5。

3.根据权利要求1所述的蒿属植物中单体奇蒿黄酮的提取方法，其特征在于：步骤A中，将中药奇蒿粉碎，取奇蒿粉末30kg，加入70％的乙醇水溶液300L，加热70℃回流提取2h，提取2次，将提取液减压浓缩，得总粗提取物。

4.根据权利要求1所述的蒿属植物中单体奇蒿黄酮的提取方法，其特征在于：步骤B中，将步骤A制得的总粗提取物加10L水溶解。

5.根据权利要求1所述的蒿属植物中单体奇蒿黄酮的提取方法，其特征在于：步骤B所述的石油醚萃取中提取物混悬液与每次加入萃取的石油醚体积比为1:2；氯仿萃取中经石油醚萃取后的提取物混悬液与每次加入萃取的氯仿体积为1:2。

6.根据权利要求1所述的蒿属植物中单体奇蒿黄酮的提取方法，其特征在于：步骤B中氯仿部位浸膏1.5kg，加入1.5kg硅胶干法拌样上柱，装柱硅胶7kg，以石油醚-二氯甲烷-甲醇-甲酸系统8:2:1:0.1的溶液溶解硅胶装柱。