[发明专利]一种全人源抗TLR4的抗体Fab及其全分子抗体IgG和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因重组抗体药物技术领域，涉及一种全人源抗TLR4的抗体Fab及其全分子抗体IgG，以及其在制备阻断炎症反应药物中的应用。

背景技术

感染性休克亦称脓毒性休克,或中毒性休克，是指由微生物及其毒素等产物所引起的脓毒病综合征伴休克。感染灶中的微生物及其毒素、胞壁产物等侵入血循环，激活宿主的各种细胞和体液系统，产生细胞因子和内源性介质，作用于机体各种器官、系统，影响其灌注，导致组织细胞缺血缺氧、代谢紊乱、功能障碍，甚至多器官功能衰竭。其特点是病情重、进展快、死亡率高。

感染性休克最重要的发病机制主要与感染的细菌及其内毒素引起的一系列炎症因子有关。内毒素血症可引起发热反应,内毒素直接作用于下丘脑体温调节中枢，或作用于白细胞使之释放内原性致热原；促使血管活性物质如缓激肽、组胺、5-羟色胺、血管紧张素等释放，使血压下降，导致微循环障碍；引起白细胞和血小板减少，激活凝血、纤溶系统，产生出血倾向；弥漫性血管内凝血；经C3旁路或经典途径激活补体；直接或间接损害肝脏，引起糖代谢紊乱及酶学、蛋白代谢的改变；激活白三烯、前列腺素、巨噬细胞、单核细胞及内皮细胞活性。

脂多糖是细菌内毒素(endotoxin)的主要成分，是革兰氏阴性细菌胞壁的成分。内毒素有多种生物活性，进入人体血液可造成内毒素血症(ETM)，可引起多种病理生理过程变化如发热、休克、弥漫性血管内凝血和粒细胞减少等，甚至造成严重后果如呼吸窘迫综合症(ARDS)，急性肾衰竭(ARF)，甚至多器官功能衰竭等多种疾病，最终可因内毒素休克死亡。

TLR4(Toll-like receptor 4,TLR4)是Toll样受体家族的成员之一，也是一种模式识别受体，能够识别微生物进化过程中的一些保守结构PAMP(pathogen-associatedmolecular pattern,PAMP)，如LPS，被认为是内毒素激活炎症反应的关键。TLR4在体内和体外对LPS效应起着主要感受器的作用，并调节细胞的促炎症因子表达和组织对损伤的炎症反应。近年来，对LPS的信号转导与TLR4的关系的研究取得了重大进展。TLR4属于Ⅰ型跨膜受体蛋白；胞外区由富含亮氨酸的重复序列LRR组成，胞内区与IL-1受体胞内区相似，称为TIR(Toll/IL-1receptor)区。TLR4广泛表达在各种淋巴细胞表面，其中既包括非特异免疫细胞如巨噬细胞、中型粒细胞和肥大细胞，又包括介导特异免疫反应的T淋巴细胞和B淋巴细胞，活化TLR4将诱导产生一系列的炎症介质，从而产生强有力的炎症反应。LPS在细胞外被识别后导致TLR4受体寡聚化激活,将LPS刺激信号向细胞内转导,通过MyD88依赖和非MyD88依赖的2条途径触发一系列的信号激联反应,诱导NF-κB、AP-1和IRF-3等转录因子磷酸化和核转位，上调TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8和IFN-γ等细胞因子的表达,最后启动炎症反应。TLR4信号转导通路在这一过程中起着极其重要的作用，可能会成为治疗内毒素血症的重要靶点。

目前，研究人员普遍认为TLR4是内毒素发挥生物学效应的瓶颈和内毒素瀑布效应的限速步骤，阻断TLR4对内毒素信号的传导，是控制内毒素生物效应的最为有效的手段。虽然现有技术报道了对TLR4进行的相关研究，但是尚无开发出针对人源TLR4的抗体，从而不能有效控制内毒素的生物效应，因此对于TLR4介导的各种炎症反应，没有得到十分有效的控制。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明目的在于提供一种全人源抗TLR4的抗体Fab及其全分子抗体IgG，以及该抗体CDR区域的核苷酸及氨基酸序列、抗体可变区核苷酸及氨基酸序列，及其在抑制TLR4介导的炎症反应中的用途。

为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究，包括全人源免疫型Fab噬菌体抗体库的构建，抗TLR4特异性抗体的筛选、纯化，抗TLR4全分子抗体IgG的制备、表达及纯化，抗TLR4全分子抗体IgG的特性分析，抗TLR4全分子抗体IgG对TNF-α表达的影响，最终获得了如下技术方案：

一种全人源抗TLR4的抗体Fab，包含轻链可变区和重链可变区，其中：

(1)所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；