[发明专利]一种布鲁氏菌的快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明为检测布鲁氏菌的快速检测试剂盒，属于生物技术领域。

背景技术

布鲁氏菌病(brucellosis)又称地中海弛张热，马耳他热，波浪热或波状热，是由布鲁氏菌引起的人畜共患性全身传染病，其临床特点为长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大等。

犬布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的犬兽共患病，犬被感染后，多数呈隐性感染，缺乏明显的临床症状。布鲁氏菌的抵抗力较强，在土壤、水、乳汁中可生存较长时间，100℃加温数分钟即可将其杀死，对消毒药的抵抗力也较弱1％来苏儿、2％福尔马林、5％石灰乳液等都能在数分钟内杀死该菌。布鲁氏菌主要存在于妊娠母畜的生殖器官内，并随分娩或流产的胎儿、胎水及阴道分泌物及乳汁向外排出；病公畜的精液中也有大量的病原菌，常可随配种而传染。

布鲁菌属分为6个种19个生物型，6个种分别为羊种，牛种，猪种，绵阳种，沙林鼠种和犬种。不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。在临床细菌检验工作中，除根据细菌的形态、染色、培养特性进行初步鉴定外，对绝大多数分离的未知菌的属、种鉴定无论是应用手工鉴定还是自动化仪器鉴定，都需要通过这些生化反应来实现，掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。

发明内容

本发明中的试剂盒包含快速检测反应试验板和反应实验条，用于体外标本中细菌-布鲁氏菌的培养的鉴别。

试剂盒原理

分别对布鲁氏菌的6个生化反应进行鉴定，其中糖分解反应包括对葡萄糖和阿拉伯糖的鉴定。

1、糖分解反应原理：各种细菌含有发酵不同糖类的酶，分解糖类的能力各不相同。布鲁氏菌分解糖类后的终末物产酸，可利用此特点以鉴别布鲁氏菌。

2、硫化氢反应原理：布鲁氏菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生硫化氢，硫化氢遇铅或亚铁离子则形成黑褐色的硫化铅或硫化亚铁沉淀。

3、氨基酸脱羧酶试验：布鲁氏菌具有氨基酸脱羧酶，能分解氨基酸使其脱羧生成胺(精氨酸-精胺)和二氧化碳，是微孔变碱，指示剂发生颜色改变。

4、尿素分解实验：布鲁氏菌具有脲酶，能分解尿素产生大量氨，使反应呈碱性，指示剂发生颜色改变。

5、氧化酶实验：氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。布鲁氏菌具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。

6、硝酸盐实验：硝酸盐还原反应包括合成过程和代谢过程，首先硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；其次获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。硝酸盐还原的过程因细菌不同而异，布鲁氏菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵，可利用此特点以鉴别布鲁氏菌。

布鲁菌的生化特征

(注：“+”表示阳性反应，“-”表示阴性反应)

试剂盒组成

1、10块鉴定反应试验板。

2、10张结果记录单。

3、操作说明书1份。

4、OX反应实验条10条。

反应实验条是由试剂浸润并干燥的用于氧化酶(OX)反应鉴定的纸条，反应试验板是由7个含有反映试剂的小孔组成，加入测定的细菌悬液，培养后，细菌的代谢作用产生了变化。根据判读结果，鉴定待检测的细菌的结果。反应板和反应条的制备方法

每块反应试验板共有7个反应微孔，每个微孔对应不同的生化试验，最后一个空为0孔，0孔为不加试剂的阴性对照孔。每种试剂按100μl/孔加入微孔板中。真空干燥后盖塑料盖并装入包装袋，以4℃-8℃低温保存。

反应实验条的制备方法，每个实验条浸到100ml的氧化酶实验试剂中，与反应试验板一起进行真空干燥，十个为一组进行包装，低温保存。

所述试剂分别为：

1、糖类发酵试验：加入100μl的0.75％的糖类。

2、硫化氢试验：加入0.5％的含硫氨基酸作为反应试剂。

3、氨基酸脱羧酶试验：加入100μl的0.5％的精氨酸。

4、尿素分解实验：加入100μl的3％的尿素。

5、氧化酶实验：使用1％盐酸二甲基对苯二胺100μl。

6、硝酸盐实验：加入1％硝酸钾作为反应试剂100μl。

所述0.75％的糖类分别为葡萄糖和阿拉伯糖。

所需显色试剂及配置方法：