[发明专利]一种基于DNA水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的基于DNA水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法，其特征在于，联合DNA水凝胶和核酸荧光染料检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性，所述的检测包括如下步骤：

(1)制备DNA水凝胶，所述DNA水凝胶的结构如下：

其中

m、n、x的比值为1:10～50：0.00001～0.001；

(2)DNA分子杂交和控温洗涤，所述的DNA分子杂交为：将步骤1)中制得的凝胶分别加入到含有完全互补DNA的缓冲液和被检测的含有多个单核苷酸变异或SNPDNA缓冲液中，在特定温度下进行分子杂交和洗涤，在所述特定温度下，完全互补DNA与含有多个单核苷酸变异或SNP的DNA在凝胶中的含量形成显著差异；

(3)核酸荧光染料染色成像，所述的核酸荧光染料为选自SYBR Green I、溴化乙锭、PicoGreen、GelRed或GelGreen的可选择性结合双链核酸的染料。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的DNA水凝胶是以甲叉双丙烯酰胺为交联剂，丙烯酰胺与甲基丙烯酰胺修饰探针DNA的共聚物为骨架的高分子水凝胶。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的甲基丙烯酰胺修饰探针DNA是通过DNA合成仪将甲基丙烯酰胺单体接入到探针DNA序列末端制备而得的。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在凝胶单体溶液中，加入甲基丙烯酰胺修饰探针DNA，在引发剂过硫酸铵和N,N,N’,N’-四甲基乙二胺的作用下，交联成含有探针DNA的丙烯酰胺含量为4～25％的DNA水凝胶。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺＝10～50:1。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺＝20～30:1。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的单核苷酸变异是指C/C、A/A、G/G、G/T、G/A、C/A、C/T、T/T SNP以及两个以上的单核苷酸错配。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，将荧光染料加入到步骤2)中的缓冲液中进行染色，经特定波长的光照成像，实现SNP的肉眼鉴别。