[发明专利]基于高效液相色谱-电雾式检测器法同时测定7种黄芪皂苷类成分的方法

说明书

技术领域

本发明属于制药领域，具体涉及一种基于高效液相色谱-串联电雾式检测器法同时测定含黄芪的中药中7种黄芪皂苷类成分的方法。

背景技术

本发明是基于中国发明专利ZL200410022665.9所述中药组合物，该组合物以黄芪和红花为有效成分。

该中药组合物具有益气活血，化瘀通脉等功效，适应于冠心病、心绞痛属于气虚血瘀证者。制剂中黄芪皂苷类成分是其主要活性成分，具有调节免疫，改善大脑缺血，抗血栓及抗应激，心室重构保护，心肌抗氧化等功能。其在制剂中含量的高低，直接影响着注射用芪红脉通的药理作用。现行标准采用比色法测定黄芪总皂苷，专属性不强；文献仅对少数黄芪皂苷(黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)进行测定，难以全面控制其质量。且文献方法多采用HPLC－ELSD，虽然ELSD对糖类、皂苷类、银杏内酯等弱紫外吸收的化合物检测具有一定的适用性，但其检测限相对较高，对低含量成分检测的重复性较差。黄芪皂苷结构式：

黄芪甲苷：R1＝glc，R2＝xyl

黄芪皂苷Ⅰ：R1＝glc，R2＝R5＝H，R3＝R4＝Ac

异黄芪皂苷Ⅰ：R1＝glc，R2＝R4＝H，R3＝R5＝Ac

Cycloastragenol-3-O-β-D-(3,4-di-O-acetyl)xylopyranosyl-6-O-β-D-glucopyranoside：R1＝glc，

R2＝R3＝H，R4＝R5＝Ac

黄芪甲苷Ⅱ：R1＝glc，R2＝R4＝R5＝H，R3＝Ac

异黄芪甲苷Ⅱ：R1＝glc，R2＝R3＝R5＝H，R4＝Ac

CyclocephalosideⅡ：R1＝glc，R2＝R3＝R4＝H，R5＝Ac

电雾式检测器(CAD)是近年来在市场上被逐步推广的一款高灵敏度、通用型、质量型检测器。具有灵敏度高、重现性好、检测范围宽等特点，且其检测信号不依赖于被检测物质的化学结构中的发色团，可用于糖类、脂质类、固醇类和皂苷类等样品的检测。

针对现有技术中对黄芪皂苷类成分检测的灵敏度不高、检测限相对较高，对低含量成分检测的重复性较差的技术问题，需要提供一种新的黄芪皂苷类成分的测定方法，以全面控制其质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于高效液相色谱-电雾式检测器法同时测定含黄芪的中药中7种黄芪皂苷类成分的方法。

本发明建立HPLC－CAD联用的方法同时测定7种黄芪皂苷，可以实现黄芪药材或成品制剂的多指标质量控制。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种基于高效液相色谱-电雾式检测器法同时测定含黄芪的中药组合物中7种黄芪皂苷类成分的方法，采用C₁₈色谱柱，以水(A)－乙腈(B)为流动相，梯度洗脱，体积流速:0.8～1.2mL·min^-1；电雾式检测器的检测温度为25～35℃；所述梯度洗脱的程序为：0～5min乙腈：25％；5～30min乙腈：25％→40％；30～35min乙腈：40％；35～50min乙腈：40％→60％；50～55min乙腈：60％→25％；55～60min乙腈：25％；

或者为：0～5min乙腈：30％；5～15min乙腈：30％→35％；15～35min乙腈：35％→60％；35～40min乙腈60％；40～45min乙腈：60％→30％；45～55min乙腈：30％；

再或者为：0～5min乙腈：25％；5～25min乙腈：25％→40％；25～40min乙腈：40％→60％；40～45min乙腈60％→25％；45～55min乙腈：25％。

所述的C₁₈色谱柱优选为KromasilC₁₈色谱柱、PhenomenexC₁₈色谱柱或Waters C¹⁸色谱柱。

该方法中柱温为25～35℃，优选为30℃。

所述的体积流速优选为1.0mL·min^-1。

所述电雾式检测器的检测温度优选为30℃。

电雾式检测器的检测条件更进一步优化为：雾化气：N₂；雾化气压力：34.7Psi；氮气流速：约4L·min^-1；喷雾器温度：30℃；采样频率：10Hz，增益：16。