[发明专利]一种药物筛选试剂盒

权利要求书

1.一种药物筛选试剂盒,所述的试剂盒包括如下材料：

①秀丽隐杆线虫野生型N2；

②秀丽隐杆线虫突变体MT2124；

③秀丽隐杆线虫CB1275；

④NGM培养基；

⑤大肠杆菌OP50；

⑥染料：2',7'-二氯二氢荧光素二乙酯。

2.根据权利要求1所述的药物筛选试剂盒，其特征在于，所述的肿瘤是由ras原癌基因过表达引起的。

3.根据权利要求1所述的药物筛选试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒所用的秀丽隐杆线虫为同步化后的线虫，线虫同步化的步骤为：

①挑选成熟的秀丽隐杆线虫至装有1mlM9液的离心管中，4000rpm离心5分钟，去上清；

②向离心管中加入500μL1M氢氧化钠，500μL6.4％(V/V)次氯酸钠，震荡裂解；

③去掉上清，向沉淀中加入1.5μLM9液，摇匀，4000rpm离心5分钟，重复该步骤三次；

④向洗净的卵中加入500μLM9液，18℃24小时孵化成L1期秀丽隐杆线虫。

4.根据权利要求1所述的药物筛选试剂盒,其特征在于，所述的秀丽隐杆线虫的浓度为100条/20μl。

5.如权利要求3所述的药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，所述试剂盒的使用方法为：

(1)秀丽隐杆线虫的染色与检测

将如权利要求3所述同步化后的L1期秀丽隐杆线虫MT2124混匀，计数单位液体体积中秀丽隐杆线虫的数目，备用；在96孔板上取2孔，每个孔中先加入140μL的S液，然后加入20μL大肠杆菌菌体溶液，每个孔中加入90条左右的秀丽隐杆线虫MT2124，第一个孔为阴性对照，加入20μL蒸馏水，另一个孔加入供试药物；最后使每个孔的液体体积都是200μL；然后将液体混匀，20℃振荡培养6天左右，待其发育为成虫，即产生假阴门后，用M液从平板上冲下，转移到离心管中，待秀丽隐杆线虫自然沉淀，除去上清液，留取秀丽隐杆线虫；加入含0.05％(V/V)的吐温20的M9液，待秀丽隐杆线虫自然沉淀，除去上清液，留取秀丽隐杆线虫；再用纯净的M9液洗涤至澄清，转移秀丽隐杆线虫到新的96孔板上，加样位置与原来96板对应，每个孔做三个平行对照，加入染料，分别染色，染色后的秀丽隐杆线虫在荧光显微镜下观察，拍照；并且利用荧光酶标仪检测荧光值，激发光波长485nm，发射光波长535nm；

(2)将实验数据进行处理，测量染色后的线虫荧光强度。

6.根据权利要求5所述的药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的秀丽隐杆线虫用染料染色时，染料终浓度为50μg/mL。

7.根据权利要求5所述的药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的秀丽隐杆线虫用染料染色时，染色时间为1.5小时。

8.根据权利要求5所述的药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的秀丽隐杆线虫用染料染色时，染色温度20℃。