[发明专利]一种掘氏疫霉菌的LAMP检测引物组合物及其LAMP检测试剂盒和LAMP检测方法

权利要求书

1.一种用于检测掘氏疫霉菌的LAMP引物组合物，其特征在于：由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3和反向环引物LB组成；各引物序列具体如下：

FIP：5′- CGGATTTTCTAGAACGTGGTACCAA-AATGAAGAGTCGACTCTAGCA -3′；BIP：5′- ACTATTGAGCTGGACGGCAA-TCGATAGCAGCCCAAGAG-3′；

F3：5′- GTGATCCTTTCACCCTGG -3′；

B3：5′- TTACAAATGTCAGCTGGATG -3′；

LB：5′- TGTACGTCTACAGAGGATTTGGAT -3′。

2.权利要求1所述的LAMP引物组合物在检测掘氏疫霉菌中的应用。

3.一种检测掘氏疫霉菌的LAMP试剂盒，其特征在于：包含1mL检测溶液，所述的检测溶液包括：32mM正向内引物FIP、32mM 反向内引物BIP、8mM正向外引物F3、8mM反向外引物B3、8mM环引物LB、48mM dNTPs、0.8M Tris-HC、0.4mM KCl、0.4mM （NH₄）₂SO₄、0.24mM MgSO₄、4%Triton X-100、Bst DNA polymerase 320单位，200mM羟基萘酚蓝；其中，各引物序列具体如下：

FIP：5′- CGGATTTTCTAGAACGTGGTACCAA-AATGAAGAGTCGACTCTAGCA -3′；BIP：5′- ACTATTGAGCTGGACGGCAA-TCGATAGCAGCCCAAGAG -3′；

F3：5′- GTGATCCTTTCACCCTGG -3′；

B3：5′- TTACAAATGTCAGCTGGATG -3′；

LB：5′- TGTACGTCTACAGAGGATTTGGAT -3′。

4.权利要求3所述的检测掘氏疫霉菌的LAMP试剂盒在检测掘氏疫霉菌中的应用。

5.一种检测掘氏疫霉菌的方法，其特征在于：包括提取待检微生物的DNA，以提取的DNA为模板，利用LAMP引物组合物或LAMP试剂盒进行LAMP；观察LAMP反应溶液颜色变化，天蓝色表示检测为阳性，存在掘氏疫霉菌；紫色表示检测结果为阴性，不存在掘氏疫霉菌。

6.根据权利要求5所述的检测掘氏疫霉菌的方法，其特征在于：提取待检微生物的DNA，取2 μL DNA溶液，加入23 μL LAMP试剂盒中的检测溶液进行LAMP，LAMP反应程序为：60℃~65℃，60-80 min，扩增产物进行颜色变化的观察。