[发明专利]一种病毒或细菌的浓缩方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细菌和病毒的浓缩方法，属于生物技术领域。

背景技术

壳聚糖(Chitosan)又名脱乙酰甲壳素，分子式是[CeHuNOjn，是甲壳素上的乙酰胺基脱去乙 酰基而形成的，同时聚合度降低。壳聚糖来源丰富，成本低廉，且有良好的吸附性能和生物 相容性，安全无毒，在医药、化工和农业等领域应用广泛。壳聚糖用脱除乙酰基的链节数占 总链节数的百分数表示它的脱乙酰度，一般大于70％，其脱乙酰度与其吸附特性相关。

壳聚糖经交联剂作用后易形成微球，常用的制备方法有：乳化交联法，即将原料品溶解或分 散于壳聚糖醋酸溶液中，混匀后加入到含有表面活性剂的油相中，经搅拌或超声处理，形成 W/0型乳剂，用戊二醛等进行化学交联，通过离心，纯化制得；溶剂蒸发法，即将溶有原料 品的壳聚糖醋酸溶液加入到甲苯中，经超声处理，形成W/0型乳剂，加入含戊二醛的甲苯， 室温下搅拌，离心后蒸发溶剂制得微球；复乳法，即将原料品溶于有机溶液中，然后再分散 于壳聚糖醋酸溶液中，形成0/W型乳剂，再滴加到油相中制成W/0/W型复乳，通过常压加热 (或减压)或透析方法除去有机溶剂制得微球；凝聚法，即将硫酸钠或硫酸氨或三聚磷酸钠 溶液滴入搅拌着的含吐温-80的壳聚糖醋酸溶液中，经超声或搅拌处理制得。前三种方法都 要应用有机溶剂，对多肽等生物活性物质的活性影响大，而第四种方法因不使用有机溶剂， 可克服其它方法的缺点，所用交联剂亦为无毒无害物质，安全性好。

应用凝聚法制备壳聚糖微球的方法己有数项专利申请，因所载原料品物质不同和制备工艺不 同而有多种不同用途。如：名为“离子交联制备药物缓释用壳聚糖微球的方法”的99121128.6 号申请专利是将1～8％含药物的壳聚糖溶液，再加入1～8％明胶或琼脂糖或者琼脂，搅拌均匀， 然后在30～60℃恒温2～5小时，通过针头滴加入一10～15℃冷的植物油中，2G～40分 钟后，加入0.1～5％冷的三聚磷酸钠或硫酸钠或柠檬酸钠交联离子溶液，轻微搅拌20～40分 钟后过滤，水洗干燥即可，此发明使制备的大粒径壳聚糖微球的机械性能得到显著的提高， 并能方便地制备形态好、粒径小的壳聚糖微球。名为“一种壳聚糖微球/微囊及其制备方法” 的200510055380.X号申请专利是将油相和占其0.1～4v％的表面活性剂一起搅拌；加入0.5 ～5％(w/v)的壳聚糖溶液(水相)，壳聚糖溶液与油相的体积比是1:2～20，继续搅拌；再加入 浓度为1～65％(w/v)的硫酸铵溶液，硫酸铵溶液与壳聚糖溶液的体积比为1:1～20,继续搅拌； 离心分离，分出沉淀物经洗涤干燥，即得微球。名为“一种具有生物活性药物的壳聚糖微球 及其制备方法”的200510055381.4号申请专利是将生物活性药物溶解或分散于壳聚糖的溶液 中，与加有表面活性剂的油相物质混合，经搅拌形成稳定的乳液后加入一定浓度的硫酸铵水 溶液，搅拌沉淀一定时间后分离洗涤，真空干燥后即得到包埋了生物活性药物的粒径均一的 壳聚糖微球控释载体。

微球亦不关注其成球性状。其安全性好，操作简便，成本低廉。

液体培养的细菌产物浓缩技术通常采用离心沉淀和静置沉淀的方法。

离心沉淀法一般采取3500-5000rpm离心15-25分钟，倾去上清取沉淀，可将培养物浓缩10 倍以上，但需消耗大量电能，且受机械限制，难于大规模生产。静置沉淀法是将培养物于室 温或低温(4-l(TC)下静止放置，让菌体自然沉淀，吸出上清达到浓缩的目的，一般需放置5 天以上，最大浓缩比例难于超过3倍。

病毒的浓缩技术通常采用高速离心法和超滤法。高速离心法一般采取12000-15000rpm离心 20-30分钟，倾去上清取沉淀，可将培养物浓缩10倍以上，但需消耗大量电能，且受机械限 制，难于大规模生产。超滤法是应用专门设备，将病毒培养物中的水份除去，将病毒颗粒滤 下达到浓缩目的，可将培养物浓缩10倍以上，缺点是生产成本高，生产速度和效率易受机械 限制。

发明内容

技术问题本发明的目的是用一种安全、廉价且高效的方法将悬浮于培养液中的细菌或病毒浓 缩5倍以上。