[发明专利]一种淫羊藿总黄酮的提取和分离纯化工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种淫羊藿总黄酮的提取和分离纯化工艺，属于生物医药技术领域。

背景技术

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍｂｒｅｖｉ-ｃｏｒｎｕＭａｘｉｍ、箭叶淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ.ｓａｇｉｔｔａｔｕｍ（Ｓｅｂ.ｅｔＺｕｃｃ.）Ｍａｘｉｍ、柔毛淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ ｐｕ-ｂｅｓｃｅｎｓ Ｍａｘｉｍ或朝鲜淫羊藿Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ ｋｏｒｅａｎｕｍ Ｎａｋａｉ的干燥叶，，味辛甘、性温，具有补肾阳，强筋骨、祛风湿功效，现代药理学研究表明，淫羊藿在免疫、生殖、核酸代谢、心血管以及抗衰老方面具有多种药效。

发明内容

本发明的目的是：提供一种淫羊藿总黄酮的提取和分离纯化工艺，能大大提高总黄酮的得率和含量，以克服现有技术的不足。

本发明的技术方案

一种淫羊藿总黄酮的提取和分离纯化工艺，采用Ｌ９正交设计法，以浸膏得率和总黄酮含量为检测指标优选提取工艺；用ＡＢ-８型大孔吸附树脂柱进行分离，乙酸乙酯、正丁醇萃取纯化。

前述的一种淫羊藿总黄酮的提取和分离纯化工艺中，最佳提取工艺为淫羊藿叶的粗粉中加入２７倍量水，浸泡２ｈ后，煎煮３次，每次１ｈ；淫羊藿提取液上ＡＢ-８型大孔吸附树脂柱分离，再用乙酸乙酯、正丁醇萃取。

由于采用上述技术方案，与现有技术相比，现有技术中关于淫羊藿总黄酮提取方法的研究报道众，常见的方法有水煎煮法、乙醇回流法、索氏提取法、超声提取法，本研究按这些方法提取淫羊藿总黄酮，再经大孔吸附树脂柱分离，得到淫羊藿总黄酮的含量相差不大，虽然以６０％乙醇为溶媒时提取的淫羊藿总黄酮含量较高，但含量均低于５０％，为提高淫羊藿总黄酮的含量，考虑到水具有廉价环保等特点，实验时采用水提，过大孔吸附树脂柱分离后，再用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取的方法，对提取物进行了精制，结果发现，经萃取后所得淫羊藿总黄酮的含量提高到６１％，表明，大孔吸附树脂柱分离法和萃取法相结合可以达到纯化淫羊藿总黄酮的目的。

附图说明

附图1为提取工艺因素水平表；

附图2为淫羊藿总黄酮提取工艺正交试验与结果示意图；

附图3为提取工艺方差分析表；

附图4为重现性试验示意图；

附图5为不同洗脱剂对黄酮量的影响示意图；

附图6为萃取后的结果图；

附图7为萃取后总黄酮含量示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的详细说明，但不作为对本发明的任何限制。

本发明的实施例：

１　仪器及试药

ＵＶ-２４０１型紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司），日本岛津ＡＹ-１２０电子分析天平，日本东京Ｎ１０００ＤＮＡ旋转蒸发仪，ＨＨＳ-２１-６电热恒温水浴锅（杭州艾普仪器设备有限公司）。淫羊藿叶购于贵阳市三桥中药材市场，淫羊藿苷对照品为成都曼斯特生物有限科技公司产品，批号ＭＵＳＴ-１００７０９０１,ＡＢ-８型大孔吸附树脂（天津市海光化工有限公司），９５％乙醇、乙酸乙酯（ＡＲ，上海申博化工有限公司），正丁醇（ＡＲ,上海申博化工有限公司），甲醇（ＡＲ，天津市大茂化工试剂厂），纯化水（实验室自制）。

２　方法与结果

２.１　提取工艺的优选

２.１.１　因素水平的选择

为确定淫羊藿总黄酮的最佳提取工艺，以加水量、浸泡时间、煎煮时间和煎煮次数为影响因素，按每个因素３水平，选用Ｌ９（３^４）正交表安排试验，结果见附图１,以浸膏得率和总黄酮含量为考察指标,选取最佳工艺。

２.１.２　标准曲线的绘制

精密称取淫羊藿苷对照品１０.０ｍｇ，置于１００ｍｌ量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为１００.０ｍｇ／Ｌ的淫羊藿苷对照品溶液。精密吸取对照品溶液０.５０、１.００、２.００、３.００、４.００、５.００ｍｌ分别置于２５ｍｌ量瓶中，用甲醇稀释至刻度,以甲醇为空白对照，用紫外分光光度计在２７０ｎｍ处测定吸光度,以吸光度Ａ对淫羊藿苷浓度Ｃ进行回归，得到回归方程为：Ａ＝０.０３６３Ｃ ＋０.０７０７，ｒ＝０.９９９８，结果表明在２.００～２０.００ｍｇ／Ｌ范围内，线性关系良好。

２.１.３　样品的制备和测定结果