[发明专利]一种快速测定血清或血浆中甘胆酸含量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种快速测定血清或血浆中甘胆酸含量的试剂盒及其制备方法和用途。

背景技术

甘胆酸(Cholyglycine,CG)是胆酸与甘氨酸结合而成的结合型胆酸，在肝细胞内，胆固醇经过及其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸(CA)和鹅去氧胆酸(CD-CA)。胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7、C12)，侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结合。

CG由肝细胞合成，正常代谢途径为肠肝循环，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食物消化。95％胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。在血清中主要以蛋白结合形式存在，溢入体循环的总量小于1％。在正常情况下，外周血中胆酸含量甚微,正常成人无论空腹或餐后,其血清CG浓度稳定在低水平。当肝细胞受损时，肝细胞摄取CG能力下降，致使血中CG含量增高；胆汁郁滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流血液循环的CG含量增高，也使血CG含量增高。测定血清甘胆酸(CG)是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一。

临床上急性肝炎、慢性活动性肝炎、原发性肝癌、肝硬化、慢迁肝、梗阻性肝病、肠—肝循环障碍、胆石症伴黄疸、胆管、胆囊排泄功能障碍患者血CG均明显高于正常人。

甘胆酸同时也是妊娠晚期血清中最主要的胆汁酸组分。正常妊娠时孕妇血清CG水平随孕周逐步增高，大量雌激素会引起肝细胞膜的改变，减少窦状膜浆的流动性，从而出现胆汁分泌减少，返流入血，出现妊娠期内胆汁淤积现象，CG水平升高。胎盘绒毛静脉腔内外均处于高浓度胆汁酸刺激之中，引起血管收缩，胎盘绒毛表面血管痉挛，氧合血流量减少，导致胎儿缺氧，可出现各种并发症，如胎儿宫内窘迫、早产等。

目前已知的甘胆酸检测方法有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法(CL)等。但这些方法均存在较多缺陷，如放射免疫法同位素试剂具有放射性污染及有效期较短和操作不方便等弊端，酶联免疫吸附法操作较为繁琐，耗时较长，不适宜临床上使用。化学发光法尽管灵敏度较高，但需要专用的测定设备，费用较高不利于推广。而胶乳增强免疫比浊法操作简便、可适用于全自动生化分析仪，检测时间不到10分钟适合临床推广。但目前我国市场上的甘胆酸检测试剂盒准确度、灵敏度、重复性仍然较差。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种快速测定血清或血浆中甘胆酸(CG)含量的试剂盒，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种快速测定血清或血浆中甘胆酸(CG)含量的试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含CG单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的CG单克隆抗体采用荧光微球标记。

优选的，所述金标垫上的CG单克隆抗体采用180nm荧光微球标记，EX(nm)＝650/Em(nm)＝670，具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重复性好的优点。

优选的，所述底板为PVC底板。

优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。

优选的，所述检测线上包被有CG单克隆抗体。所述金标垫上的CG单克隆抗体与检测线上的CG单克隆抗体可以是相同的抗体，也可以是不同的抗体。

优选的，质控线上包被羊抗鼠抗体。

优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为20-200mM。

优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为5-50mM。

优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。

优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19 TWEEN 20、S-20TWEEN 80、S-13 TRITON X-45、S-14 TRITON X-100、S-15 TRITON X305中的任意一种或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为10～50g/L。