[发明专利]一种AFP、GP73、PIVKA-Ⅱ联合检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种AFP、GP73、PIVKA-Ⅱ联合检测试剂盒及其制备方法和用途。

背景技术

甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是胎儿发育早期由肝脏和卵黄囊合成的一种糖蛋白，随着胎儿发育和出生后年龄的增长，血液中AFP水平逐渐下降，成人血清AFP浓度的参考区间为1-20μg/L。AFP是肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的敏感特异的标志物，血清AFP浓度超过400μg/L持续4周或者200-400μg/L持续5周以上，高度怀疑肝细胞肝癌；同时血清AFP水平还有可用肝癌的大小判断、肝癌的疗效评估和预后判断。但据统计，大约20％-30％的肝细胞肝癌患者血清AFP水平不高；部分良性肝病，包括急性肝炎、慢性肝炎和大面积的肝坏死，也会有血清AFP的升高。因此，用血清AFP作为肝细胞肝癌的标志物存在一定程度的假阳性和假阴性。

高尔基体糖蛋白-73(GolgiProtein 73,GP73)又称Ⅱ型高尔基体膜蛋白(Golgiphosphoprotein2,GOLPH 2)，其在慢性肝炎、肝硬化等病人血清中浓度升高，而在肝细胞肝癌病人血清中升高更加明显，和正常人或良性肝病病人之间呈显著差异。有研究表明，血清GP73用于肝癌的诊断，优于血清AFP检测。据文献报道，GP73检测肝癌的灵敏度为69％,特异性为75％。对于早期肝癌的诊断,GP73的敏感性为62％,而AFP敏感性仅为25％。AFP水平低于20μg/L的肝癌患者中,有57％的人群GP73水平显著升高。这表明，GP73的应用能够大大提高对AFP阴性的肝癌患者的检出率。

维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导的蛋白质(Protein Induced by Vitamin K Absence or Antagonist-II，PIVKA-Ⅱ)，又叫脱-γ-羧基凝血酶原(Des-gamma-carboxy prothrombin，DCP)或异常凝血酶原，1984年首次被认定为原发性肝癌的标志物。肝细胞肝癌患者血清中PIVKA-Ⅱ浓度水平远高于肝硬化和转移性肝癌患者，而且其血清浓度变化和患者肝细胞癌的动态变化(手术、治疗和复发等)相关。后来的研究证实，PIVKA-Ⅱ和AFP检测可以互为补充，二者的联合检测可以将肝细胞肝癌的诊断率提高到84％，仅大约16％的肝细胞肝癌患者两者都呈阴性结果。目前PIVKA-Ⅱ检测已被列入《日本肝癌学会肝癌诊疗规范2009年版》中，用于肝细胞癌高危人群的筛查及原发性肝癌的辅助诊断；我国卫生部发布的《原发性肝癌诊疗规范(2011年版)》中用于肝细胞癌辅助诊断的标志物也包括PIVKA-II。

综上，AFP是经典的肝细胞肝癌的生化标志物，GP73和PIVKA-Ⅱ是新型肝癌标志物的典型代表。相对而言，GP73的敏感性更高，而PIVKA-Ⅱ的特异性更好，三种指标单独应用时都存在一定程度的假阴性和假阳性，如果通过恰当的方式和手段，同时联合检测三项指标，互为补充，将有助于进一步降低肝细胞肝癌临床诊断的假阴性和假阳性，提高这些标志物对肝细胞肝癌的诊断性能，更好地为临床和患者服务。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种定量检测甲胎蛋白AFP、高尔基体糖蛋白-73GP73、维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ的检测试剂盒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种定量检测甲胎蛋白AFP、高尔基体糖蛋白-73GP73、维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ的检测试剂盒，包括互相独立的甲胎蛋白AFP检测试纸卡、高尔基体糖蛋白-73GP73检测试纸卡和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ检测试纸卡，所述检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述甲胎蛋白AFP检测试纸卡的金标垫上包含甲胎蛋白AFP抗体，所述高尔基体糖蛋白-73GP73检测试纸卡的金标垫上包含高尔基体糖蛋白-73GP73抗体，所述维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ检测试纸卡的金标垫上包含维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的甲胎蛋白AFP抗体、高尔基体糖蛋白-73GP73抗体和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ抗体采用荧光微球标记。