[发明专利]一种人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，尤其涉及一种人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法。

背景技术

免疫性血小板减少症(ITP)是一种常见的以血小板计数减少及出血风险增加为特点的病情反复的自身免疫性疾病。虽然该疾病是一种良性疾病，但由于疾病本身或治疗相关不良反应使患者的生活质量降低。

目前推荐ITP的一线治疗主要为糖皮质激素、静脉注射免疫球蛋白和抗D免疫球蛋白。二线治疗主要包括脾切除、利妥昔单抗、血小板生成素受体激动剂(TPO-RA)。

糖皮质激素60-70％的有效率，但在减量或原剂量的持续用药中容易发生激素依赖，结果为血小板的下降，并且非常多的副作用，如：高血压、高血糖、溃疡、感染、股骨头坏死等。

静脉注射免疫球蛋白、抗D免疫球蛋白、血小板生成素受体激动剂(TPO-RA)价格昂贵，且药物有效时间非常短暂，停药半月后复发。

脾切除70％左右的患者有效，但术后也存在复发的问题，同时感染等手术并发症使得一些患者不能接受。

通过全面衡量各治疗方法的有效持续时间、疾病复发率、不良反应及药物价格等，利妥昔单抗正逐渐被越来越多用于治疗ITP患者。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法，旨在解决现有的血小板减少症治疗方法存在的有效持续时间短、疾病复 发率高、不良反应大及药物价格昂贵的问题。

本发明是这样实现的，一种人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法，所述的人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法为：

步骤一、动物的选择与免疫：采用6-12周SPF级雌性Balb/c小鼠，免疫流程同一般血清的制备；

步骤二、将免疫后的小鼠预处理B细胞和骨髓瘤细胞通过PEG法进行细胞融合；

步骤三、采用HAT选择培养，得到杂交瘤细胞，检测细胞培养上清液，进行阳性克隆的筛选；

步骤四、进行杂交瘤细胞的克隆化；

步骤五、进行杂交瘤细胞的冻存和复苏；

步骤六、大量生产人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体。

效果汇总

本发明实施例中，采用小剂量利妥昔单抗治疗免疫性血小板减少症，32例ITP患者，可评估29例，完全反应18例，有效5例，总反应率79.3％，其中新诊断患者总反应率50％，持续性、慢性ITP患者总反应率高达83.9％，考虑与联合应用其他药物如TPO、IL-11、静脉免疫球蛋白、糖皮质激素相关，进一步支持利妥昔单抗与其他药物的联合在临床应用可能会取得较单药更好的效果，在免疫性血小板减少症治疗中有较好的疗效，不良反应小，可作为有效的二线治疗手段。

附图说明

图1是本发明实施例提供的人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明是这样实现的，一种利妥昔单抗，包括活性成分人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体、枸橼酸钠、聚山梨醇酯80、氯化钠、注射用水。

进一步，如图1所示，所述的人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法为：

S101、动物的选择与免疫：采用6-12周SPF级雌性Balb/c小鼠，免疫流程同一般血清的制备；

S102、将免疫后的小鼠预处理B细胞和骨髓瘤细胞通过PEG法进行细胞融合；

S103、采用HAT选择培养，得到杂交瘤细胞，检测细胞培养上清液，进行阳性克隆的筛选；

S104、进行杂交瘤细胞的克隆化；

S105、进行杂交瘤细胞的冻存和复苏；

S106、大量生产人类CD20的人鼠嵌合单克隆抗体。

进一步，所述的利妥昔单抗的使用方法为：