[发明专利]抗苯乙醇胺A单克隆抗体、抗原检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗苯乙醇胺A单克隆抗体，以及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株、含有该抗苯乙醇胺A单克隆抗体的检测试剂盒，属于免疫学技术领域和瘦肉精检测技术领域。

背景技术

苯乙醇胺A(Phenylethanolamine A，PEAA)俗称克伦巴胺，化学结构式为2-[4-(4-硝基苯基)丁基-2-羟基氨基]-1-甲氧基苯乙醇，英文名称2-(4-(nit rophenyl)butan-2-y lamino)-1-(4-me-thox yphenyl)ethanol，分子式为C₁₉H₂₄N₂O₄，化学结构式如下：

苯乙醇胺A具有典型的苯乙醇胺结构，由于同β-肾上腺素能受体激动剂结构类似，因而被认为是一种新型“瘦肉精”。PEAA饲喂动物同样具有促进骨骼生长，减少脂肪蓄积，增加瘦肉率等作用，由于PEAA的检测手段滞后，替代克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等瘦肉精被广泛应用，造成PEAA在可食性动物体内蓄积性残留，人食用后可引起头晕、心跳加快、肌肉震颤、心悸、呼吸困难等症状，严重可引起中毒，甚至死亡，严重威胁人类的健康。我国农业部的第1519号公告将PEAA列为禁止在饲料和动物饮水中使用的物质。

目前，苯乙醇胺A检测方法多为仪器分析法。尽管仪器分析法比较准确，但所用仪器价格昂贵、操作复杂，样品预处理复杂，检测费用高，需要专业人员操作，不适合现场大批量样本的快速筛选。

免疫分析方法是20世纪八九十年代优先研究开发和利用的兽药残留分析技术之一，是将有机化学、免疫学与理化分析等学科有机结合起来，开辟了一个新的分析技术领域，具有操作简单、快速、灵敏度高、特异性强、检测费用低等优点，在现场快速检测方面具有广阔的应用前景和开发潜力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术之缺陷提供一种抗苯乙醇胺A单克隆抗体，进一步的，本发明提供该单克隆抗体的应用、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞、含有该单克隆抗体的检测试剂。

本发明所述技术问题是由以下技术方案实现的。

一种抗苯乙醇胺A单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2014222的杂交瘤细胞株PEAA-3B5产生。

上述抗苯乙醇胺A单克隆抗体亚型为IgG₁(κ)。

上述苯乙醇胺A单克隆抗体在用于配制检测生物样品中的苯乙醇胺A残留的非诊断目的试剂盒中的应用。

一种产生上述抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株PEAA-3B5，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2014222。

一种检测试剂盒，该试剂盒含有上述苯乙醇胺A单克隆抗体。

进一步的，该检测试剂盒，含有经辣根过氧化物酶(HRP)、黑曲霉葡萄糖氧化酶小牛肠碱性磷酸酶(AKP)、或大肠杆菌β-D-半乳糖苷酶标记的苯乙醇胺A单克隆抗体。

更进一步的，该检测试剂盒，还含有用苯乙醇胺A和载体蛋白的偶联物PEAA-OVA预包被的检测板、苯乙醇胺A标准品液、显色液和洗涤液。

一种制备上述苯乙醇胺A单克隆抗体的方法，包括如下步骤：

⑴将苯乙醇胺A与牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白采用重氮化法连接，制备抗原；

⑵用步骤⑴所得抗原免疫小鼠，免疫后小鼠断尾取血，检测该血清的效价和抑制，选取免疫效果好的小鼠；

⑶取步骤⑵所述免疫效果好的小鼠的脾细胞，使其与小鼠骨髓瘤细胞融合，以选择性培养基培养所得融合细胞，测定抗体的效价和抑制，筛选阳性孔，通过有限稀释法对阳性孔进行亚克隆，直至建立单一抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

⑷将步骤⑶中所得的单一抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株注入石蜡油致敏的同系小鼠腹腔，制备腹水；

⑸将步骤⑷制备的腹水经过辛酸硫酸铵和Protein G亲和层析柱纯化，获得抗苯乙醇胺A的单克隆抗体。