[发明专利]发酵法生产γ-氨基丁酸

权利要求书

1.一种发酵法生产γ-氨基丁酸，其特征在于：包括以下步骤：

（1）种子培养

枯草芽孢杆菌的平板培养基：葡萄糖 10 g/L，蛋白胨 5 g/L，氯化钠 5 g/L，1.5% 琼脂粉，pH 7.0，

枯草芽孢杆菌的种子培养基：葡萄糖 10 g/L，蛋白胨 5 g/L，氯化钠 5 g/L，pH 7.0，121℃下灭菌 20 min ，培养温度为 37℃，

从平板上挑取一单菌落，接种至装有 150 ml 种子培养基的 500 ml 三角瓶中，于摇床上 200 rpm 37℃振摇培养 14 h；

（2）枯草芽孢杆菌的分批发酵

将种子以 0.5% 接种量接种至 3 L 发酵培养基，发酵培养基：葡萄糖 10 g/L，蛋白胨 5 g/L，氯化钠 5g/L，氯化钙0.1g/L， Zn²⁺0.08-0.1g/L ，FeCl₃ 0.1-0.4g/L ，pH 自然，在转速 600rpm，通气量1.0 vvm，35-37℃，培养 0.4-2h 后，发酵结束；

（3）催化反应：

发酵结束后，于发酵液中直接投加w/v为60-65% 的L-谷氨酸，调节pH为4.5～4.8 进行催化反应，反应条件为 30-35℃催化 0.5-2h；

（4）脱色、提纯：催化液在发酵罐中升温至 121℃灭菌 30min，灭菌结束后通过发酵罐夹套循环水冷却至常温，处理液按照10％添加量添加孔径小于30nm的活性炭，90℃处理20min 以进行脱色，将脱色液流过孔径 0.2μm 的陶瓷微滤膜，控制膜管压力在0-0.3MPa 之间，流速 65L/h，收集的滤液通过管道流入装有截留分子量 300 道尔顿以下的高分子纳滤膜的膜管中，控制膜管压力在 0-1.5MPa 之间，流速为240L/h，收集流出液通过管道流入装有截留分子量 100 道尔顿以下的高分子纳滤膜的膜管中，控制膜管压力在 0-1.5MPa 之间，流速为 250L/h，弃流出液，待浓缩液体积浓缩至15-19L时，停止浓缩，得浓缩液，向浓缩液中加入 3 倍体积 95％的乙醇，4℃静置0.8-1.5h，过滤收集晶体，再按 10ml/g 比例加入 95％乙醇，40℃搅拌10min，过滤收集晶体 ；将收集的晶体 100℃沸腾干燥20min，得到 γ- 氨基丁酸成品。