[发明专利]一种矿区土壤中超高浓度耐镉菌株及其分离筛选方法

说明书

本发明公开了一种矿区土壤中超高浓度耐镉菌株及其分离筛选方法，本发明的矿区土壤中超高浓度耐镉菌株的名称为肠杆菌Enterobacter sp，保藏编号为CGMCC NO.9795。本发明的矿区土壤中超高浓度耐镉菌株具有良好的重金属抗性镉耐受浓度达1800mg/l，并且本发明的矿区土壤中超高浓度耐镉菌株的分离筛选方法对仪器要求低，操作简单，安全快捷。本发明的矿区土壤中超高浓度耐镉菌株对矿区受污染土壤修复具有重要的意义，具有重大的社会和经济价值。

技术领域

本发明涉及土壤修复技术领域，尤其涉及一种矿区土壤中超高浓度耐镉菌株及其分离筛选方法。

背景技术

江西赣南素有“世界钨都”之名，钨矿众多。在开采钨资源的同时，也给矿区及当地生态系统留下了一些生态问题，如钨矿尾矿石、尾矿砂等的压占耕地，破坏地表景观与植被，尤其是钨矿开采过程中伴生的镉(Cd)、铅(Pb)、砷(As)等污染物给当地土壤和水资源带来严重的重金属污染。生物修复被认为是一种来源广泛、处理费用低、无污染且修复效率高的方法,特别是微生物修复技术越来越受到学者的青睐。

修复重金属污染的微生物主要是土著真菌和细菌，不同微生物对重金属污染的耐性也不同，通常为真菌>细菌>放线菌。污染土壤中的土著微生物往往具有较高的重金属抗性,从中分离的微生物由于适应当地的自然环境,所以能有效修复重金属污染。但是目前还没有报道有很好重金属抗性的菌株，所以寻找一种高重金属抗性的菌株，就对土壤修复和环境保护具有重要的意义。

发明内容

基於此,本发明提供了一种矿区土壤中超高浓度耐镉菌株及其分离筛选方法，采用稀释平板分离法从矿区重金属镉(Cd)污染土壤中分离、筛选出耐高浓度Cd(耐受浓度达1800mg/l)微生物菌株E,通过16SrRNA系列分析得知,该菌株为阴沟大肠杆菌Enterobactersp。

本发明采用如下技术方案：

本发明的矿区土壤中超高浓度耐镉菌株的名称为肠杆菌Enterobacter sp；保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2014年10月17日；保藏编号为CGMCCNO.9795。

本发明的矿区土壤中超高浓度耐镉菌株的分离筛选方法的具体步骤如下：

(1)土样采集：

采集矿区土壤表层下0～20cm处的土样，然后加水制得土样稀释液；

(2)耐镉菌株的分离与纯化：

用无菌移液管分别吸取10^-1、10^-2、10^-3、10^-4各土样稀释液0.2mL于Cd²⁺浓度为10mg/L、30mg/L、60mg/L的3种浓度培养基的平板中，用无菌玻璃棒涂布均匀，每个浓度、每个梯度平行做3个，室温下在牛肉膏蛋白胨培养基上培养2d，马铃薯培养基上培养3d，分离后长出的单菌落用接种环分别挑取少许置于Cd²⁺浓度60mg/L的同种培养基上，室温下在牛肉膏蛋白胨培养基上培养2d，马铃薯培养基上培养3d，待菌落长出后，检查其特征是否一致，同时将其进行镜检，是否为单一的微生物，若发现有杂菌，需再一次进行分离、纯化，直到获得纯种培养；

(3)Cd抗性菌株的高浓度筛选：

将纯化所得菌株依次接种到含Cd²⁺浓度分别为60～1800mg/L的系列浓度梯度的同种培养基上，室温下在牛肉膏蛋白胨培养基上培养2d，马铃薯培养基上培养3d，挑选出抗高浓度Cd²⁺的菌株，得到本发明的超高浓度耐镉菌株。