[发明专利]一种用于检测MC-LR型微囊藻毒素的生物电极传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测MC-LR型微囊藻毒素的生物电极传感器，其特征在于，所述生物电极传感器是在丝网印刷电极的工作电极修饰上多壁碳纳米管-壳聚糖电沉积薄膜，并在多壁碳纳米管-壳聚糖电沉积薄膜的表面进一步交联上MC-LR型微囊藻毒素抗体。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测MC-LR型微囊藻毒素的生物电极传感器，其特征在于，所述丝网印刷电极是标准三电极，PET基底，工作电极是碳(直径3mm)，对电极是碳，参比电极是银/氯化银。

3.一种制备如权利要求1或2所述的用于检测MC-LR型微囊藻毒素的生物电极传感器的方法，其特征在于，具体制备步骤如下：

(1)将壳聚糖(CS)溶于0.5％的稀盐酸溶液中，室温条件下磁力搅拌40min，再进行抽滤得到1.0wt％的壳聚糖溶液；

(2)将多壁碳纳米管加入到步骤(1)中所得的壳聚糖溶液中，室温条件下磁力搅拌3h，初步得到多壁碳纳米管分散的壳聚糖溶液，其中多壁碳纳米管的浓度为0.5mg/mL；

(3)将步骤(2)中所得的多壁碳纳米管分散的壳聚糖溶液超声10min，进一步得到均匀分散的多壁碳纳米管-壳聚糖溶液，用1.0wt％的氢氧化钠溶液调节此混合溶液的pH值为4.0～6.0；

(4)将丝网印刷电极(SP)浸入到步骤(3)中所得的多壁碳纳米管-壳聚糖溶液中，进行电沉积，电沉积电压为-1.5～-3.0V，沉积时间为20～300s，形成多壁碳纳米管-壳聚糖电沉积薄膜，再用超纯水洗涤得到初步修饰电极(CS-MWCNTs/SP)；

(5)将步骤(4)中制得的CS-MWCNTs/SP电极浸入到1.0wt％的戊二醛溶液中0.5～1h；

(6)将步骤(5)中所得修饰后的CS-MWCNTs/SP电极用超纯水洗涤，在其工作电极上滴加5～25μL MC-LR型微囊藻毒素抗体溶液(anti-MC-LR)，室温条件下静置交联0.5～3h，即得到目标检测(anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)电极传感器。

4.一种检测MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，使用了如权利要求1-3任一项所述的生物电极传感器。

5.根据权利要求4所述的一种检测MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)制备标准HRP酶标微囊藻毒素溶液：将不同浓度的微囊藻毒素溶液(MC-LR)分别与微囊藻毒素HRP酶标物溶液(HRP-MC-LR)以等体积混合，得到一系列标准HRP酶标微囊藻毒素混合溶液(MC-LR+HRP-MC-LR)，其混合液中MC-LR的浓度是0.0、0.3、0.8、1.0、2.0ppb；

(2)将生物电极传感器(anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)用超纯水洗涤，再分别滴加5～25μL步骤(1)中所制备的MC-LR+HRP-MC-LR溶液，在室温条件下孵育0.5～3h，得到具有不同浓度MC-LR的修饰电极：MC-LR+HRP-MC-LR/anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP；

(3)分别测试步骤(2)中孵育后的MC-LR+HRP-MC-LR/anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP电极的电流值Ip；

(4)绘制MC-LR浓度与Ip的标准曲线；

(5)将待测的微囊藻毒素溶液(MC-LR)与微囊藻毒素HRP酶标物溶液(HRP-MC-LR)以等体积混合，取5～25μL混合液滴加到超纯水洗涤过的生物电极传感器(anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)上，室温条件下孵育0.5～3h，测试孵育后电极的电流值Ip；结合步骤(4)绘制的标准曲线即可得到待测样品溶液中微囊藻毒素的浓度。

6.根据权利要求5所述的一种检测MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，步骤(3)中测试电流值Ip的方法为：测试工作液为含有2mM对苯二酚(HQ)、1mM双氧水(H2O2)的0.05M PBS(pH＝7.0)缓冲液，电化学检测方法为微分脉冲伏安法。