[发明专利]高抗氧化活性寡肽复配物及其制备方法

权利要求书

1.一种高抗氧化活性寡肽复配物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)用胃蛋白酶和碱性蛋白酶以单酶或有次序的双酶分别对鸡蛋清蛋白和乳清蛋白进行水解，取上述鸡蛋清蛋白水解液的一种和上述乳清蛋白水解液的一种；

(2)采用超滤和树脂富集上述两种蛋白来源水解液中的强疏水性抗氧化肽，通过梯度洗脱获得目标肽，即为树脂粗分离组分；

(3)将步骤(1)中得到的两种蛋白来源水解液或/和步骤(2)中得到的两种蛋白来源水解液的树脂粗分离组分分别进行两两复配，得到复配物。

2.根据权利要求1所述的高抗氧化活性寡肽复配物的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，分别以鸡蛋清蛋白粉和乳清蛋白粉为原料，加水配置成蛋白悬浊液，在85℃-95℃保持10min，并不断搅拌使蛋白变性，冷却至室温，加入碱性蛋白酶进行水解；酶解结束后，加入胃蛋白酶水解，反应后灭酶，冷却至室温后调pH值至5.0-6.0，离心并收集上清液；

在步骤(2)中，对步骤(1)所得上清液进行超滤，收集滤过液，真空浓缩后冷冻干燥鸡蛋清蛋白抗氧化肽和乳清蛋白抗氧化肽粗品；所得上述粗品用DA201-C大孔吸附树脂吸附，然后用乙醇梯度洗脱，收集、真空浓缩并冷冻干燥洗脱组分，即可获得两种蛋白的高抗氧化活性树脂粗分离组分；

在步骤(3)中，鸡蛋清蛋白酶解肽和乳清蛋白酶解肽的水解液的肽浓度比为1：3-3：1进行复配；所述两种水解液来源的粗分离组分的肽浓度比为1：3-3：1进行复配。

3.根据权利要求2所述的高抗氧化活性寡肽复配物的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，鸡蛋清蛋白或乳清蛋白悬浊液的质量浓度为1％-6％。

4.根据权利要求2所述的高抗氧化活性寡肽复配物的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，碱性蛋白酶酶解条件为：酶的添加量为6000U-12000U/1g蛋白；pH值为6.5-11.0；水解温度为50℃-70℃，酶解时间为1-6h。

5.根据权利要求2所述的高抗氧化活性寡肽复配物的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，胃蛋白酶酶解条件为：酶的添加量为8000U-25000U/1g蛋白；pH值为1.0-2.5；温度为35-40℃，水解时间为1-6h。

6.根据权利要求2所述的高抗氧化活性寡肽复配物的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，胃蛋白酶和碱性蛋白酶的水解顺序可以颠倒，或用上述两种酶的一种进行鸡蛋清蛋白水解液和乳清蛋白水解液的制备。

7.根据权利要求2所述的高抗氧化活性寡肽复配物及其制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，灭酶条件为：95℃保持15min，冷却至室温后在转速4000r/min离心15min。

8.根据权利要求2所述的高抗氧化活性寡肽复配物及其制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，超滤的膜截留分子量为3kDa；超滤操作前超滤膜要先后用乙醇、pH值为1-2的酸液、pH值为11-12的碱液和去离子水各循环清洗20min，操作压为0.1-0.2MPa。

9.根据权利要求2所述的高抗氧化活性寡肽复配物及其制备方法，其特征在于：步骤(2)中，取步骤(1)中所得抗氧化肽粗品溶于pH值为5.0-6.0的PBS缓冲液中，加入DA201-C大孔吸附树脂静态吸附1-3h，用体积分数为10-50％的乙醇洗涤后，再用体积分数为50-100％的乙醇洗脱，洗脱时间0.5-3h，收集、真空浓缩及冷冻干燥75％的乙醇洗脱组分，实现强疏水高活性抗氧化肽的富集。

10.权利要求1至9任一项所述的高抗氧化活性寡肽复配物的制备方法制得的复配物。