[发明专利]一种禾谷类作物单倍体群体的构建方法

权利要求书

1.一种大麦单倍体植株的繁殖方法，所述方法包括：

使用来源于小孢子的单倍体大麦的分蘖节基部分生组织产生丛生芽；和

繁育丛生芽，从而获得单倍性遗传稳定的单倍体植株；

其中，将所述分蘖节基部接种到丛生芽诱导培养基上培养，诱导产生丛生芽，所述丛生芽诱导培养基为添加有0.3-0.8mg/L噻二唑苯基脲的1/2MS培养基；

将由分蘖节基部长出的丛生芽转移到丛生芽增殖培养基上培养，在丛生芽增殖的同时壮苗，所述丛生芽增殖培养基以1/2MS培养基配制，除含有1/2MS培养基的成分外，还添加有300-500mg/L水解干酪素、10-30mg/L亚精胺、0.3-0.8 mg/L噻二唑苯基脲和0.8-1.2mg/L多效唑。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）由大麦小孢子获得单倍体植株；

（2）培养步骤（1）获得的单倍体植株，使其形成分蘖；

（3）由步骤（2）所得分蘖节基部诱导产生丛生芽；以及

（4）繁育所述丛生芽，获得单倍体再生植株。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述分蘖节基部接种到丛生芽诱导培养基诱导培养的培养温度为20-26℃，光周期为8-14h·d^-1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将增殖培养后的丛生芽转移到1/2 MS培养基培养，以降低植株的内源激素，然后转到生根诱导培养基上诱导生根，形成完整再生植株，其中，所述生根诱导培养基以1/2 MS培养基配制，除含有1/2MS培养基的成分外，还添加萘乙酸0.03-0.08 mg/L和多效唑0.8-1.2 mg/L。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述生根诱导培养基中，萘乙酸的含量为0.04-0.06 mg/L，多效唑的含量为0.8-1.0 mg/L。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分蘖节基部获自来源于小孢子的单倍体植株，其中，用0.2-0.5M的甘露醇提取液收集大麦的小孢子，将其置于诱导培养基中进行诱导培养，获得愈伤组织后，将愈伤组织转移至分化培养基，获得单倍体植株，然后再在生根壮苗培养基上培养所述单倍体植株。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，将所获得的单倍体植株放置温室中漂浮培养1-2天，进行炼苗；炼苗结束后，将所得植株转移到1/2 Hoagland溶液中培养至形成多个分蘖。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，

所述诱导培养基以N₆培养基为基础，所不同的是添加有0-2500mg/L的KNO₃和0-400mg/L的(NH₄)SO₄，并添加有400-2500mg/L的水解干酪素和400-2500mg/L的谷氨酰胺；

所述分化培养基以2/3MS为基本培养基，其中加有6-苄氨基腺嘌呤0.3-1.2 mg/L、6-糠氨基嘌呤0.5-2.0 mg/L、萘乙酸0.01-0.1 mg/L、麦芽糖10-50 g/L以及肌醇95-105mg/L，pH为5.5-6.2；以及

所述生根壮苗培养基以1/2MS 为基础，含有1/2MS培养基的成分外，还添加有萘乙酸0.02-0.08mg/L、多效唑2.0-10.0mg/L和蔗糖10-40g/L，pH5.6-6.0。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述丛生芽诱导培养基中， 噻二唑苯基脲的含量为0.4-0.6mg/L；

所述丛生芽增殖培养基中，水解干酪素的含量为400mg/L，亚精胺的含量为20mg/L，噻二唑苯基脲的含量为1.0mg/L和多效唑的含量为1.0mg/L。