[发明专利]一种利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵领域，涉及一种利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法。

背景技术

那西肽是一种带有5个座哇环的多肽类抗生素，那西肽为黄绿色物质，呈粉末状或细针状结晶，熔点为310～320℃(伴随分解)。那西肽可溶于氯仿、毗陡、二甲基酸胺、二甲基亚矾，微溶于甲醇，乙醇、乙酸乙酯和苯，不溶于水。那西肽以其相对安全性及良好的应用效果符合当前人们对饲料添加剂的要求，是一种比较理想的饲用抗生素换代品。目前，欧盟和日本已批准并广泛使用。

那西肽是用微生物培养方法生产的，那西肽产生菌主要有活跃链霉菌(streptomyes actuosus)、抗生素链霉菌(S.antibiotics)和青灰色链霉菌(S.glaucogriseus)，其中以活跃链霉菌为最好。

但是，现有的微生物发酵方法生产那西肽，生产成本高、产率低。

发明内容

鉴于此，本发明目的在于提供一种产率高的那西肽生产方法。

为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是，提供一种利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法，包括以下步骤：

1)使用无菌接种针挖取适量砂土接种至斜面培养基上培养数天，向培养成熟的孢子斜面加入无菌水，使用无菌接种针轻轻刮下孢子；培养温度为28℃，湿度40-60％；

2)向种子罐培养基上接种步骤1)制备得到的孢子繁殖菌体，接种量22亿，通气比0.9，罐压0.04Mp，溶氧控制在30％，当菌浓达到30％进行移种，移种周期25h，移种pH值为6.8；培养温度30℃，

3)向发酵罐培养基上接种步骤2)繁殖的菌体，接种量10％％，通气比0.8，罐压0.04Mp，全程流加氨水来调节pH值并补充氮源，通过调节搅拌转速和通气比来控制溶氧，放罐周期为180-220h，发酵结束，即得到那西肽混悬液。

进一步地，所述斜面培养基的组分为：可溶性淀粉2.1g/100mL，K₂HPO₄0.08g/100mL，MgSO₄0.06g/100mL，FeSO₄0.003g/100mL，NaCl0.03g/100mL，KNO₃0.02g/100mL，琼脂2.0g/100mL。

进一步地，所述发酵罐培养基的组分为：可溶性淀粉6.0g/100mL，黄豆饼粉3.5g/100mL，(NH₄)₂SO₄1.0g/100mL，CaCO₃1.0g/100mL，K₂HPO₄0.08g/100mL，NaCl0.10g/100mL，豆油0.8g/100mL，消沫剂0.05g/100mL。

进一步地，所述种子罐培养基的组分为：葡萄糖2g/100mL，黄豆饼粉2.5g/100mL，(NH₄)₂SO₄0.2g/100mL，MgSO₄0.03g/100mL，碳酸钙CaCO₃0.4g/100mL，K₂HPO₄0.02g/100mL，豆油0.3g/100mL，消沫剂0.02g/100mL。

与现有技术相比，上述技术方案中的一个技术方案具有如下优点：

1、本发明优化了活跃链霉菌的活化，通过不同阶段培养活跃链霉菌，提高其生物活性。

2、本发明针对不同阶段，配置了更加专一的培养基，为活跃链霉菌的生长提供更加合理的碳源、氮源、以及金属离子，充分保障菌体的正常生产和代谢。

3、本发明方法那西肽收率提高60％以上。

具体实施方式

实施例1

本实施例所用活跃链霉菌来源为市购。

按照以下配方制作培养基：斜面培养基、种子罐培养基和发酵罐培养基。

斜面培养基：可溶性淀粉2.1g/100mL，K₂HPO₄0.08g/100mL，MgSO₄0.06g/100mL，FeSO₄0.003g/100mL，NaCl0.03g/100mL，KNO₃0.02g/100mL，琼脂2.0g/100mL；