[发明专利]5’-鸟苷酸的生产方法

说明书

此案是申请日为2010年08月10日、中国申请号为201010250541.1、发明名称为“5’-鸟苷酸的生产方法”的发明申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及5’-鸟苷酸的生产方法以及在5’-鸟苷酸的生产中使用的新微生物。5’-鸟苷酸作为调味料、医药以及调味料、医药的原料是有用的。

背景技术

作为5’-鸟苷酸(鸟苷-5’-一磷酸，以下也称“GMP”)的工业制备方法，采用发酵法生产鸟苷，再采用酶法将所得的鸟苷磷酸化，从而得到5’-鸟苷酸的方法(专利文献1～4)。

此外，还已知下述生产方法：将增大了GMP合成酶活性的属于埃希氏菌属的微生物与下述产氨短杆菌在包含XMP和氨气或谷氨酰胺的培养基中进行培养，高效率地将XMP转化为GMP，并使培养液中生成并蓄积GMP，其中，所述产氨短杆菌的腺苷-三磷酸(ATP)生物合成(以下也称“ATP再生”)活性高，所述腺苷-三磷酸(ATP)是代谢葡萄糖来从5’-黄苷酸(XMP)合成GMP的反应所必需的(非专利文献1)。

另一方面，提出了利用发酵法来生产GMP的方法。例如，专利文献5中公开了一种GMP的生产方法，该生产方法中培养具有腺嘌呤营养缺陷性、显示德夸菌素(decoyinine)或甲硫氨酸亚砜抗性、且具有GMP生产能力的芽孢杆菌属的突变株，并收集培养基中生成蓄积的GMP。此外，专利文献6公开了一种GMP的生产方法，该生产方法中培养使具有肌苷酸(肌苷酸-5’-一磷酸，以下也称“IMP”)生产能力的埃希氏菌属细菌的2种5’-核苷酸酶基因缺失、以及IMP脱氢酶和GMP合成酶基因增强而得到的菌株，并收集培养基中生成并蓄积的GMP。但是，一般而言，GMP的直接发酵收率不充分，与前述酶法相比较未必实用。

如前述，针对5′-鸟苷酸的生产进行了各种研究，并已有数个成功的实例。但是，对于核苷酸分解酶还有许多不明之处，已经发现了数种核苷酸分解酶，已知通过使它们缺失能够提高收率(专利文献6、7)，但完全抑制其分解是困难的，这是一个大问题。

现有技术文献

专利文献

专利文献1特开平07-231793号公报

专利文献2特开平10-201481号公报

专利文献3国际公开第96/37603号小册子

专利文献4特开2001-245676号公报

专利文献5特公昭56-12438号公报

专利文献6特开2002-355087号公报

专利文献7国际公开第2006/078132号小册子

非专利文献

非专利文献1Tatsuro Fujio等，Biosci.Biotech.Biochem.，1997年，第61卷，5号，840-845页

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的课题是创造新微生物，所述新微生物能够在使用微生物从XMP生产GMP的方法中使用、且能够高效率地将XMP转化为GMP。

解决问题的方法

本发明人等为解决上述问题进行了深入研究，结果发现：通过利用经过修饰从而使得nagD基因无法正常发挥功能、且经过修饰从而增大了GMP合成酶活性的埃希氏菌属微生物，能够高效率地将XMP转化为GMP，从而完成了本发明。

本发明的一类实施方式提供5’-鸟苷酸的生产方法，该方法中使黄苷酸作用于经过修饰从而使得nagD基因无法正常发挥功能、且还经过修饰从而增大了5’-鸟苷酸合成酶的活性的、具有将黄苷酸转化为5’-鸟苷酸的能力的微生物，来生成5’-鸟苷酸，并收集5’-鸟苷酸。

本发明的其它实施方式提供前述方法，其中，所述微生物经过修饰从而使得nagD基因无法正常发挥功能、而且还经过修饰而增加了guaA基因的表达，从而增大了5’-鸟苷酸合成酶的活性。

本发明的其它实施方式提供前述方法，其中，所述guaA基因编码下述(A)或(B)的蛋白质。

(A)具有SEQ ID NO：2所述的氨基酸序列的蛋白质。

(B)下述蛋白质，所述蛋白质具有在SEQ ID NO：2所述的氨基酸序列中包含1个或数个氨基酸残基的取代、缺失、插入、添加或倒位的氨基酸序列，且具有5’-鸟苷酸合成酶活性。