[发明专利]双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺在制备抗癌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺的医药新用途——在制备抗癌药物中的应用。

背景技术

癌症是世界上威胁人类生命最主要的疑难病症之一，它和心血管疾病并列，成为医学界的两大难题，居世界病死原因的前两位。临床上常用的抗肿瘤药物多具有较强的毒副作用，在杀死肿瘤细胞的同时也伤害正常细胞。因此，寻找高效、低毒的抗肿瘤活性成分已经成为抗癌药物研究的一个重要途径。

双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺（(N1,N3-bis(3-methoxysalicylidene) diethylenetriamine，Valdien，VALD），是一种柔链席夫碱配合物，其结构式如下：

双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺目前作为发光剂应用于催化领域，而其在医药方面的活性目前尚未见报道。双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺的结构、合成及性能参见JACS/ J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 5319-5328。

发明内容

本发明的目的是提供一种双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺的医药用途——在制备抗癌药物中的应用。

下面通过体内外肿瘤模型，运用细胞生物学、生物化学、分子生物学等手段，对双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺（Valdien，VALD）的抗肿瘤活性及其作用机制进行深入研究，以期为双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺在肿瘤治疗的临床应用提供理论依据，对该药物的抗肿瘤临床应用起到推动作用。

一、双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺的体外抗肿瘤作用的研究

1 材料

1.1 药品：双3-甲氧基2-羟基-苯甲醛缩二乙烯三胺 VALD)，纯度98%；由兰州大学化学化工学院窦伟教授提供。顺铂 (cisplatin, CDDP) 注射液，购自南京制药厂有限公司；氟尿嘧啶注射液 (5-fluorouracil, 5-FU)，购自上海海普制药厂；阿霉素，深圳万乐药业有限公司产品。

1.2 试剂及配制：新生小牛血清：杭州四季青生物工程有限公司产品，批号：120125；RPMI 1640培养基：Gibco Invitrogen Corporation，U.S.A.产品；噻唑蓝（MTT）：Fluka公司产品，用pH=7.4的PBS配制成5 mg/ml，过滤除菌分装，4℃保存；胰蛋白酶粉末：Gibco BRL公司产品，用Hank’S液配制成浓度为0.25%，过滤除菌分装，-20℃冻存；十二烷基硫酸钠（SDS）：为Sigma公司产品，用0.01 M的HCl配制成10%的浓度。

1.2.1 RMPI 1640液的配制：取RMPI 1640 10.4 g，加双蒸水溶解后加入2.0 g NaHCHO₃使其充分溶解，容量瓶加至950 ml后调pH值为7.4～7.6，然后定容到1000 ml，过滤除菌分装，4℃保存备用。

1.2.2 小牛血清的灭活：置小牛血清于56℃水浴中恒温灭活35分钟，无菌分装，-20℃保存备用。

1.2.3胰蛋白酶配制： D-Hanks 溶液的配制：准确称量NaCl 8.0 g，KCl 0.4 g，KH₂PO₄ 0.06 g，Na₂HPO₄.H₂O 0.06 g（或 Na₂HPO₄.12H₂O 0.134 g），NaHCO₃  0.35 g，酚红0.02 g，依次溶于双蒸水中并不时搅拌，定容至1000 ml，分装于100~250 ml 的容量瓶中，高压灭菌，4℃保存备用。胰蛋白酶配制：酶粉0.25 g干燥烧杯中加少许D-Hanks液成糊状在用D·Hanks液定容至100 ml，后置室温4 h（或4 ℃冰箱过夜，混匀），滤过除菌，分装20-25 ml/瓶，-20 ℃保存备用。

1.2.4 分装谷丙酰胺：称取谷氨酰胺3 g、丙酮酸钠1.1 g，蒸馏水定容于100 ml ，充分、溶解后，用蔡氏滤器过滤除菌，分装成2 ml /瓶-20℃  储存备用，标明名称、日期。注：谷丙酰胺在1640配置2周后不稳定，原1640中的成分已丧失，应再次补充。