[发明专利]一种粪便细菌的保存液

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体而言，涉及一种粪便细菌的保存液。

背景技术

人肠道中生存着10万亿到100万亿个细菌，分属数百到上千个不同的种属，其数量为人体细胞数量的10倍，基因数量是人体基因数量的150-200倍。这些共生在人体肠道中的微生物是人体一大“未发现的”器官，更有学者认为人本身就是人体细胞和细菌共同组合而成的共生生物体。它们与人体共生，以人体摄入的食物以及肠道分泌物为食，合成必须氨基酸，维生素，短链脂肪酸等重要物质进入人体，促进宿主健康；相反，其中一些病原菌也分泌有害物质进入体内，损害宿主的健康。由于肠道菌群的复杂和多样性，人类对其结构多样性和功能重要性一直缺乏足够的认知。直至近几年，随着第二代测序等技术的进步，微生物组的黑盒才得以打开，并借助无菌动物的验证，发现了肠道微生物与大量的疾病直接相关，甚至在许多疾病中扮演了病因的角色。并且，其中大量的疾病，例如肥胖，糖尿病，动脉粥样硬化，炎症性肠炎等都是高发病率重要公共卫生问题。

由于肠道微生物寄居在人的肠道内，因此最便捷，也是目前采用的最主要的方式是研究人体排出的粪便的微生物，以此代表大肠内的共生微生物。粪便采集之后，通过提取细菌的总DNA，扩增核糖体16S rRNA可变区，测序，以及一系列生物信息学分析，可以了解粪便中的细菌构成，进一步研究其和人体健康疾病之间的关系。

由于粪便离体后，其环境也发生了变化，例如无氧环境转变成有氧环境，其中提供微生物代谢的能量来源也进入只消耗而不补充的状态。与此同时，其中的部分细菌还保持了活性，继续代谢和生长，而由于环境的变化，不同细菌其增长与死亡的速率已经不同于排便前。因此，需要对粪便进行一些保存措施，尽量将其中微生物的构成稳定在刚刚离体时的状态，从而最好的代表大肠中的共生微生物。目前采用的保存方法为采集粪便后立即冻存在-20℃或者更低的温度中。由于细菌在低温状态下代谢速率极大的降低，因此可以在一段时间内维持粪便中细菌的构成。

就其效果而言，冻存在-20℃或者更低的温度中是可以在一段时间内(一周以上)保持粪便内的细菌构成不发生显著的变化。然而其最大的缺陷则是冻存条件在某些时候无法实现，例如采样者外出，采得的粪便需要携带一段时间才可以拿回实验室冻存，或者采样者与实验室并不在同一地点，需要采样后通过快递等方式寄送到实验室后才可以冻存，而在这个过程中，微生物的构成可能已经发生了改变。然而目前国内并没有任何技术来解决这一问题。

发明内容

本发明涉及一种粪便保存液的配方，按照配方所述配置保存液，将采集的粪便直接置于保存液中，无需冻存，即可达到稳定其中微生物构成的作用。使用该配方保存粪便样本可以在常温下达到冻存粪便样本的效果，从而使采样者在任何时候都可以进行采样和样品的保存，也能够用于粪便样本的长途运输。

本保存液配方(配方1)如下：

表1.保存液配方

异硫氰酸胍(Guanidine Thiocyanate)0.47％EDTA-二钠(EDTA Na2)1.86％