[发明专利]抗chMDA5蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及杂交瘤细胞株及由其分泌的单克隆抗体，尤其涉及抗chMDA5蛋白单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本发明进一步涉及该单克隆抗体在检测鸡黑色素瘤分化相关基因5(chicken melanoma differentiation associated gene 5,chMDA5)蛋白或传染性法氏囊病病毒(infection bursal disease virus，IBDV)感染以及将其作为实验工具研究chMDA5蛋白在鸡组织细胞的分布定位、表达变化以及在IBDV感染过程中的作用等方面的应用，属于模式识别受体MDA5蛋白的检测领域。

背景技术

机体的天然免疫系统在抵抗病毒感染方面发挥着重要作用。病毒感染宿主细胞后，宿主细胞可以通过模式识别受体(pattern recognition receptors，PRR)识别病原相关分子模式(pathogen associated molecule patterns，PAMP)，从而区别病原生物与机体自身(AKIRA S,UEMATSU S,TAKEUCHIA O.Pathogen recognition and innate immunity[J].Cell,2006,124(4):783-801.)。RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是一类新发现的能够特异性识别细胞质中病毒dsRNA的模式识别受体，黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation associated gene 5,MDA5)是RLRs家族成员之一，属于DExD/H box RNA解旋酶，可表达于病毒感染的各种细胞。MDA5含有两个天冬酰胺富集域样的结构域(CARD-like结构域)，能够识别进入胞质中的dsRNA，通过衔接蛋白分子即IFN-β启动子激活因子1(IFN-β-promoter stimulator 1,IPS1)启动特异性的信号通路，激活促炎症因子基因和I型干扰素基因(NF-κB和IRF₃)，诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生(KATO H,TAKEUCHI O,STOA S,et al.Differential roles of MDA5and RIG-I helicases in the recognition of RNA viruses[J].Nature,2006,441(7089):101-105.TAKEUCHI O,AKIRA S.MDA5/RIG-I and virus recognition[J].Curr Opin Immunol,2008,20(1):17-22.)。最新研究发现，在鸡细胞内是MDA5活化介导IFN-β的合成分泌而发挥抗病毒作用(LERINIG M,SUMMERFIELD A,ZIMMER G,et al.Chicken cells sense influenza A virus infection through MDA5and CARDIF signaling involving LGP2[J].J Virol,2012,86(2):705-717.)。然而，模式识别受体表达是一把双刃剑，一方面可以通过诱导先天性和获得性免疫反应抑制病毒复制并最终清除病毒感染，另一方面又可以诱导组织细胞损伤，促进病毒的扩散。