[发明专利]一种液体培养真菌菌丝体的收集方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种收集液体培养真菌菌丝体的方法。

背景技术

研究人员在进行真菌菌丝体的总DNA、RNA和蛋白质的提取或真菌发酵配方、参数探索等研究中，需要对菌丝体进行液体培养增殖，然后将菌丝体从发酵液中分离出来。目前，多采用高速离心法和过滤法将菌丝体从发酵液中分离出来。然而，这两种分离方法都存在一定的问题。

对于高速离心法，一方面，由于某些真菌菌种液体培养的菌丝体较为粘稠，成悬浮液大颗粒状态，因此，即使采用很高的离心速度，也难以将菌丝体完全紧凑地沉降到离心管底部，分离效果差；而另一方面，菌丝球颗粒内部的水分也难以通过离心去除，并且还存在离心机成本高、操作繁琐耗时等问题。

对于过滤法，目前包括采用滤纸进行真空抽滤的方法和普通纱布过滤法，对于滤纸真空抽滤法，一方面，同样存在由于某些真菌菌种发酵液的浓度高且粘稠，很难得到较干燥的菌丝的问题，另一方面，对于这样的发酵液，滤纸微孔极易被发酵液堵住，因此，后续难以过滤下去，必须不断更换滤纸，而由于滤纸湿后容易被刮破，因此吸附在滤纸上的菌丝体也较难完整取下来；对于纱布过滤法，由于纱布易沾菌丝，因此，在样品数量多的情况下易造成不同样品间的菌丝交叉污染，不可重复利用，从而造成不必要的浪费，并且在采用纱布过滤时，纱布层数少则菌丝容易漏出，层数多则每层纱布间及纱布孔中容易残留菌丝，易造成样品的浪费和数据的误差。

发明内容

针对以上两种方法收集效果不佳、操作繁琐耗时、成本高等的不足，本发明提供一种效果好、适用范围广、简单快捷、成本低廉且节能环保的收集液体培养真菌菌丝体的方法方法。

本发明通过以下方案达到上述目的：

一种液体培养真菌菌丝体的收集方法，采用过滤法，以钢丝网作为滤膜。

其中，作为滤膜的钢丝网在利用无菌水冲洗后，即可重复利用，节能环保且实验证明不会造成不同样品间菌丝的交叉污染。

作为优选的，上述钢丝网为150-250目的钢丝网。 

作为进一步的，上述钢丝网为200目的钢丝网，并且上述真菌为香菇、或平菇、或黑木 耳。

作为优选的，上述过滤法为真空抽滤法。

在一个优选的实施例中，一种液体培养真菌菌丝体的收集方法包括将150-250目的钢丝网制作为漏斗的滤膜，将真菌发酵液倒入抽滤系统的漏斗中，开始抽滤，至漏斗中无液滴滴下时，收集钢丝网上的真菌菌丝体，即完成液体培养真菌菌丝体的收集。

在另一个优选的实施例中，一种液体培养真菌菌丝体的收集方法包括将150-250目的钢丝网制作为漏斗的滤膜，将真菌发酵液倒入抽滤系统的漏斗中，开始抽滤，至漏斗中无液滴滴下时，分别收集钢丝网上的真菌菌丝体和抽滤系统的抽滤瓶中的真菌发酵液，即完成液体培养真菌菌丝体的收集。

进一步优选的，上述抽滤系统包括真空泵、与真空泵连接的抽滤瓶，及安装在抽滤瓶上的漏斗。

进一步优选的，上述漏斗为布氏漏斗。

在另一个具体的优选实施例中，将150-250目的钢丝网制作为漏斗的滤膜的具体步骤可以为：将150-250目的钢丝网剪成与漏斗口径一致的圆形，然后将钢丝网置于漏斗内，按压贴合成型即可。

发明人在收集液体培养的真菌菌丝体的过程中，意外发现利用钢丝网特别是150-250目的钢丝网取代常规滤纸进行真空抽滤时，获得的菌丝体的含水量降低率可低至15％-20％或以下，同时操作简单，分离速度快，钢丝网也可以重复利用还不会造成不同样品间菌丝的交叉污染。

利用本发明的液体培养真菌菌丝体的收集方法，不仅获得的菌丝体含水率低，并且适用范围广，对于较粘稠或较清澈的发酵液都适用。本发明提供的方法操作简单快捷，滤膜可重复利用，成本低，节能低碳环保，因此，值得推广使用。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。

实施例1：

一种液体培养真菌菌丝体的收集方法，采用常规的过滤法，采用钢丝网特别是150-250目的钢丝网代替常规的滤纸或纱布作为滤膜。在利用该方法收集真菌液体培养的菌丝体时，将真菌发酵液倒至漏斗的滤膜上，至漏斗中无液滴滴下时，收集钢丝网上的真菌菌丝体，即完成液体培养真菌菌丝体的收集。本实施例的钢丝网利用无菌水冲洗后，可反复利用，节能环保并且不会造成不同样品菌丝的交叉污染。

实施例2