[发明专利]大肠菌群选择性显色培养基及其检测试纸

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于大肠菌群的选择性显色培养基，以及采用该选择性显色培养基的检测试纸。

背景技术

大肠菌群是指在特定的培养条件下可以发酵乳糖、并能产酸产气的一类需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠菌群数的高低，表明食品受污染的程度，也反映摄入该食品对人体健康危害性的大小，所以检测大肠菌群或大肠杆菌在食品卫生学上具有广泛意义，如何简便、准确、快速地检测食品中的大肠菌群，也是国内外食品卫生工作者共同关注的课题，目前关于检测大肠菌群的方法有许多，例如多管发酵法、膜过滤技术、酶活性检测法、纸片法、免疫学方法(酶联免疫吸附试验和免疫荧光)和分子生物学方法等。这些方法都有一定的优缺点，比如酶活性检测法虽然比较省时省力，检测特异性高，但成本较高；纸片法比较适用于现场监测，节省了大量物力、人力，但准确性仍有待提高；PCR(Polymerase Chain React ion)检测法具有快速、特异、敏感等特点，但对实验环境有特殊要求，容易受一些因素干扰，出现假阳性结果。

法国科玛嘉公司开发出了用于大肠菌群检测的显色培养基，应用较为广泛，这种培养基主要是利用微生物种属特异性酶的特点，在培养基中加入相应的酶显色底物，经微生物生长代谢产生的酶水解后游离出色原物质，使培养物显特定颜色从而直接进行目标微生物筛选鉴别。此后，又陆续出现了其它一些大肠菌群显色培养基产品，其中生物梅里埃公司的Coli ID、RapidE-coli、Chromocultcoliforms等显色培养基也有较大的市场影响。传统微生物检测法中对目标菌进行培养后还需要一系列繁琐的验证实验，而显色培养基克服了这一缺点，实现一歩培养直接鉴定，基本能够满足对大肠菌群初歩鉴定的需要，所以大肠菌群检测显色培养基的出现在大肠菌群实验室鉴定技术中有着重要的意义。作为一项新型技术不仅要与国家的发展水平和该行业的技术水平及动态发展相协调，同时还应具有一定的普及推广性，一个好的食品微生物检测技术必须具备快速、准确、特异性及灵敏度高、省时省力和成本低等优点，目前市面上常用的显色培养基检测产品虽然可能会满足特异、敏感等检测要求，但大多数显色培养基产品都来源于国外生物试剂公司，其价格昂贵导致检测成本增加以及购买的不便利性使这个新技术成为食品标准检测方法的瓶颈，也遏制了国内的一些食品检测行业对这一产品的实际需求。

发明内容

本发明提供一种大肠菌群选择性显色培养基，以及采用该选择性显色培养基制作的检测试纸，以克服现有技术存在的上述缺陷。

本发明首先涉及一种大肠菌群选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：

所述特异性酶显色底物是4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的混合物，两者的重量配比为0.2-1：1，优选0.5-0.6：1。

本发明还涉及一种采用该选择性显色培养基制作的检测试纸，其至少含有一吸附有上述大肠菌群选择性显色培养基的吸水滤纸。

本发明采用两种特异性酶显色底物进行复配使用，出乎意料的其对于大肠菌群的特异性和敏感度较单独使用任何一种显色底物显著增强，且检出率高、检出时间短。

具体实施方式

下面给出本发明较佳实施例，以详细说明本发明的技术方案。

实施例1

一种大肠菌群显色培养基，每1000mL培养基含有：结晶紫中性红胆盐琼脂15g、特异性酶显色底物5g、二甲基甲酰胺0.05g、酵母粉1g、乳糖1g、氯化钠5g、磷酸氢二钾5g、磷酸二氢钾2g、月桂基硫酸钠0.3g。所述特异性酶显色底物是4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的混合物，两者的重量配比为0.5：1。

将上述成分溶于水至1000mL，加热煮沸，120℃灭菌15min，即可使用。

实施例2

一种大肠菌群显色培养基，每1000mL培养基含有：结晶紫中性红胆盐琼脂25g、特异性酶显色底物25g、二甲基甲酰胺20g、酵母粉5g、乳糖8g、氯化钠10g、磷酸氢二钾3g、磷酸二氢钾0.5g、月桂基硫酸钠0.1g。所述特异性酶显色底物是4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的混合物，两者的重量配比为0.6：1。

将上述成分溶于水至1000mL，加热煮沸，120℃灭菌15min，即可使用。

实施例3