[发明专利]金黄色葡萄球菌选择性显色培养基及其检测试纸

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于金黄色葡萄球菌的选择性显色培养基，以及采用该选择性显色培养基的检测试纸。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起葡萄菌属食物中毒的主要病原微生物，也是影响世界各国经济的重要食源性疾病之一。人们摄取的食物和饮料中受到金黄色葡萄球菌污染时，将会产生一种或以上的肠毒素，引起食物中毒，常见的中毒症状是呕吐和腹泻。研究发现，金黄色葡萄球菌在自然界中广泛存在，另外，金黄色葡萄球菌在人类和温血动物的皮肤和鼻腔中均能存活。食品加工者和无症状携带者是食品污染的主要来源，生产过程中缺乏卫生监督管理容易有金黄色葡萄球菌及其肠毒素的存在。食品样品中超过10⁶-10⁸CFU/g(mL)的金黄色葡萄球菌可引起食物中毒，而1g(mL)肠毒素，相当于10⁵CFU/g(mL)的金黄色葡萄球菌，即可使敏感人群在1-6h后出现中毒症状。许多官方法规规定不同种类的食品允许低浓度的金黄色葡萄球菌存在中，例如鸡蛋和熟食制品不需检出，生肉及其制品中金黄色葡萄球菌最低限量为10²-10³CFU/g(mL)。

食品中金黄色葡萄球菌常规的检验方法是在37℃环境下，金黄色葡萄球菌用选择性肉汤浓缩富集24-48h后直接接种于选择性培养基(如Baird.parker琼脂)培养，随后挑取可疑菌落经血浆凝固酶试验进行生化鉴定。传统方法需要5-6天时间，其他相似的方法如最大可能数法(Most Probable Number，MPN)同样耗时费力，不能满足快速检测需求。寻找快速、简单、准确的金黄色葡萄球菌检测方法是研究人员十分关注的课题。国内外的研究者在食品安全快速检测方面，已经取得了很大的进展，新的快速检测技术逐渐应用于食品安全快速检测领域。目前，关于金黄色葡萄球菌及其肠毒素检测的方法很多。常用的分子生物学方法主要有聚合酶链反应(Polymerase Chain React ion，PCR)、核酸探针技术、重组DNA技术以及环介导等温扩增技术等，主要用于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测，这类方法优点是灵敏度高、特异性强，但是检测方法复杂，需要昂贵的实验仪器设备以及专业技术人员操作，检测成本相对较高，同时PCR扩增产物容易引起实验室的污染等问题，也不利于在一般实验室的应用。免疫学方法应用较多的有乳胶凝集技术、酶联免疫技术、免疫荧光技术以及免疫磁珠技术等，可以实现对病原微生物的快速检测，本类技术具有操作简单、高通量的优点，在此基础上研究出的自动荧光酶标仪，可以极大程度地提高检测的灵敏度和特异性，但由于仪器设备过于昂贵，也不利于在基层实验室的推广应用。新型的测试片法、显色培养基法，以及生化试剂盒法都是在金黄色葡萄球菌传统平板检测方法改进而来的。测试片是将显色培养基附着在无纺布、滤纸等固体载体上，运用测试卡片的技术制成的，自问世以来，以其便于携带、简便、快速、特异性高等优点为许多国家所采用，尤其适用于现场以及突发公共卫生事件的快速检测检测。由于纸片面积小，微生物生长产生过多的粘液使相邻菌落融合，使用时间较长时，无法准确计数。

显色培养基的问世，是传统平板检测方法的一个重大突破。显色培养基是建立在细胞内生化反应的基础上，利用微生物自身代谢而产生特异性酶或其他特异性物质，在培养基中添加相应的显色底物，使菌落呈现特定的颜色进而实现分离和鉴别微生物的目的。目前，金黄色葡萄球菌显色培养基产品比较成熟的主要有法国科玛嘉公司的CHROMagar Staphaureus、法国生物梅利埃公司的S aureus ID和BD公司的BBLTM CHROMagarTM.Staph aureust引。近年来，国内一些生物科技公司也致力于金黄色葡萄球菌显色培养基的研究。市面上常用的显色培养基产品也有很高的特异性和灵敏度，但由于显色培养基价格昂贵，检测成本高及购买不方便，使其推广应用受到限制，不能满足实际需求。

发明内容

本发明提供一种适用于金黄色葡萄球菌的选择性显色培养基，以及采用该选择性显色培养基的检测试纸，以克服现有技术存在的上述缺陷。

本发明首先涉及一种金黄色葡萄球菌选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：蛋白胨8-12g、酵母粉5-8g、丙酮酸钠3-6g、氯化钠55-90g、亚碲酸钾30-45g、氯化锂7-10g、琼脂10-20g、复合特异性酶显色底物0.2-0.5g、二甲基甲酰胺30-75g、抗生素0.04-0.08g、助显色剂0.05-0.1g，余量为水。