[发明专利]蜡样芽孢杆菌选择性显色培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于蜡样芽孢杆菌的选择性显色培养基，以及该选择性显色培养基的制备方法。

背景技术

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种革兰阳性杆菌，芽胞杆菌属(Bacillus)中的一种。菌体细胞杆状，末端方，成短或长链，1.0～1.2×3.0～5.0微米。产芽孢，芽孢圆形或柱形，中生或近中生，1.0～1.5微米，孢囊无明显膨大。革兰氏阳性，无荚膜，运动。菌落大，表面粗糙，扁平，不规则。蜡状芽胞杆菌细菌对外界有害因子抵抗力强，分布广，是典型的菌体细胞。

蜡样芽孢杆菌在自然界中分布甚广，其中一些菌株极易污染食品、空气和水等引起食物中毒。我国近两年食源性疾病监测网的资料显示，蜡样芽孢杆菌是仅次于致病性大肠杆菌、沙门菌和副溶血性弧菌的又一重要致病菌，米饭、肉类制品、乳制品、蔬菜、水果的带菌率高达20-77％，中毒事件以在学校集体食堂、家庭、饮食服务单位等发生居多。致病性蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒主要由该菌产生的肠毒素所致，其次是该菌感染，菌量和毒素量成正比。肠毒素又分为耐热性呕吐型和不耐热性腹泻型之分，前者主要在米饭类食品中形成，食后引起呕吐型肠胃炎，后者则在各种食物中均可产生，食后致腹泻型肠胃炎。

蜡样芽胞杆菌的分离培养一般使用NGKG培养基或MYP培养基，这些培养基含有蛋黄利用蛋黄反应，包括分离培养、镜检观察、生化鉴定等多个步骤，制作工艺复杂，整个过程一般需要4-7天生产过程中容易污染，保存不方便，已不能满足微生物快速准确检测的现实需要。目前虽然有显色培养基，但是这些显色培养基使用高价的磷脂酶的底物，需添加白蛋白，制作成本高，生产过程中容易污染，保存不方便。

发明内容

本发明提供一种蜡样芽孢杆菌选择性显色培养基，以及该选择性显色培养基的制备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。

本发明首先涉及一种蜡样芽孢杆菌选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：

余量为水；

所述特异性酶显色底物是6-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇-1-磷酸钾的混合物，两者的重量比优选为1：0.01-0.1，最好是1：0.01-0.05。

所述除氧剂选自丙酮酸盐、过氧化氢、巯基乙酸盐、半胱氨酸、硫化钠或硫化亚铁。

所述丙酮酸盐、巯基乙酸盐可以是其钠盐或钾盐。

所述杂菌抑制剂为甲氧苄啶。

本发明培养基的制备方法如下：

1)将特异性酶显色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液；

2)将心-脑提取物、琼脂、葡萄糖、硫酸镁、氯化锂、除氧剂、3-吗啉代丙烷-1-磺酸、杂菌抑制剂按比例混合；

3)将步骤1)的混合液加入步骤2)混合液中，加水配成一定浓度溶液；

4)120℃灭菌15min后冷却备用。

本发明蜡样芽孢杆菌选择性显色培养基克服了现有技术中制作成本高、生产过程容易污染等弊端，无需添加蛋黄或白蛋白，底物价格低廉，降低了成本减少污染方便保存。

具体实施方式

下面给出本发明较佳实施例，以详细说明本发明的技术方案。

实施例1

蜡样芽孢杆菌选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：心-脑提取物5g、琼脂2g、6-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷0.099g、5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇-1-磷酸钾0.001g、二甲基甲酰胺0.05g、葡萄糖1-8g、硫酸镁0.2g、氯化锂0.2g、丙酮酸钾0.3g、3-吗啉代丙烷-1-磺酸0.2g、甲氧苄啶0.5-5.0g、余量为水。

具体制备方法如下：

1)将特异性酶显色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液；

2)将心-脑提取物、琼脂、葡萄糖、硫酸镁、氯化锂、除氧剂、3-吗啉代丙烷-1-磺酸、杂菌抑制剂按比例混合；

3)将步骤1)的混合液加入步骤2)混合液中，加水配成一定浓度溶液；

4)120℃灭菌15min后冷却备用。

实施例2